研究重组人肿瘤坏死因子(rHTNF)与γ-干扰素(IFN-γ)协同抗膀胱肿瘤的作用机理，探索治疗膀胱肿瘤的新方法。

 

　　材料与方法　人膀胱肿瘤细胞株BIU-87由北京医科大学泌尿外科研究所提供。(1)用MTT法^[1]测定rHTNF或IFN-γ，以及在单独应用和联合应用时，在不同药物浓度及不同作用时间内对BIU-87细胞的最大杀伤率。酶标仪测定吸光度A值。杀伤率(%)=(对照孔A值-实验孔A值)/对照孔A值×100%。(2)对经过IFN-γ（0.15μg/ml)作用6小时与未经IFN-γ作用的对照组BIU-87细胞，分别行放射配体结合时间、解离和特异性竞争试验，通过Scatchard图计算受体数目及亲和力，进行rHTNF受体分析，观察IFN-γ对TNF受体的影响。(3)IFN-γ对rHTNF内化率和降解率的影响：经IFN-γ作用6小时和未经IFN-γ作用的BIU-87细胞分别与¹²⁵I-rHTNF于37℃反应3小时后，离心沉淀细胞。将细胞悬浮于0.1mmol/L、pH 3.0的甘酸-盐酸缓冲液中，洗掉结合在细胞膜上的¹²⁵I-TNF，测定细胞内剩余的放射性，作为内化量。50%的三氯醋酸可溶解¹²⁵I-rHTNF降解产物，同时沉淀未降解的¹²⁵I-rHTNF，溶液中的放射性即代表¹²⁵I-rHTNF的降解量。然后计算细胞内¹²⁵I-rHTNF与细胞最大结合¹²⁵I-rHTNF的比值作为内化率；50%三氯醋酸溶液中的放射性与内化放射性的比值即为降解率。

 

　　结　果　(1)rHTNF和IFN-γ单独应用时对BIU-87细胞的最大杀伤率分别为61%和15%，两者联合应用时对BIU-87细胞的最大杀伤率达89%，明显高于rHTNF单独应用时对BIU-87细胞的最大杀伤率(P＜0.05)。(2)¹²⁵ I-rHTNF与BIU-87细胞于37℃反应3小时可达平衡状态。解离曲线表明该反应呈可逆性。非标记的rHTNF可竞争性抑制¹²⁵ I-rHTNF与BIU-87细胞的结合。IFN-γ对该结合试验无抑制作用。IFN-γ使BIU-87细胞表面受体数量由0.41×10^-11nmol/细胞增加至0.92×10^-11nmol/细胞，对受体的亲和力无显著影响。(3)IFN-γ可显著提高BIU-87细胞对¹²⁵I-rHTNF的内化和降解的绝对量，但对内化率和降解率无显著影响。

 

　　讨　论　TNF由激活的单核巨噬细胞和活化的T淋巴细胞及部分肿瘤细胞分泌，具有多种生物活性，是迄今发现的抗肿瘤活性最强的细胞因子，其可能成为有一定临床应用价值的抗癌生物制剂。不同类型肿瘤细胞显示对TNF不同的反应：细胞毒性、生长抑制及无作用；甚至同一种类型细胞的不同细胞株对TNF作用亦表现出不同的反应。一般认为耐受TNF的肿瘤细胞能产生小剂量的内源性TNF，内源性TNF通过诱导保护性蛋白的产生，减弱TNF对肿瘤细胞的毒性^［2］。本研究结果表明，rHTNF对膀胱肿瘤细胞株BIU-87的最大杀伤率为61%。IFN-γ和TNF对许多肿瘤细胞的生长抑制有协同作用，作用机制尚不清楚。本试验发现IFN-γ和rHTNF对BIU-87细胞的杀伤亦有协同作用，其最大杀伤率可达89%。其协同作用可能部分与INF-γ增加BIU-87细胞表面的rHTNF受体表达有关。

 

　　TNF严重的毒副作用限制了临床应用。目前已经有几种TNF衍生物研制成功。本研究提示：TNF局部用药是合理的，同时选择毒副作用较轻的TNF衍生物与IFN-γ等与其协同抗肿瘤作用的细胞因子应用，可在一定程度上减轻TNF的毒副反应。

 

　　参考文献

　　[1]　Sargent J,Eigie R,Taylor CG,et al. The identification of drug resistance in ovarian cancer and breast cancer:application of the MTT assay. Contrib Gynecol Obstet,1994,19∶64-67.

　　[2]　Mutch DG,Powell CB, Lee CY，et al.Resistance to cytolysis by TNF in malignant gynecological lines is associated with the expression of protein that prevent the activation of phospholipase A2 by TNF.Cancer Res,1992,52∶866-72.