胸腺五肽对严重烧伤病人免疫调节作用的研究
蒋春晓，张馨木，张赢予，常淑芳
(吉林大学药学院，吉林长春)
【摘要】：目的 研究胸腺五肽(Thymopentin，TP-5)对烧伤病人T淋巴细胞亚群及NK细胞的影响。方法 对烧伤患者进行双盲随机对照临床研究。检测治疗组(20例)和对照组(20例)病人伤后第2、5、10、17、22天外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞，治疗组病人从伤后第2天起接受TP-5治疗，1- d，肌肉注射，疗程20 d；对照组不给予TP-5。结果 烧伤后第2天二组病人T淋巴细胞及NK细胞无显著性差异(P>0．05)；烧伤5、10、17、22天后二组病人T淋巴细胞总数差异显著(P<0．05)，对照组CD8 细胞显著高于治疗组(P<0．01)，对照组CD4+／CD8+ ；比值显著低于治疗组(P<0．01)；治疗组NK细胞在烧伤5、10、17、22天后均高于对照组(P<0．05)。结论 胸腺五肽可作为一种良好的免疫调节剂明显提高和改善严重烧伤患T淋巴细胞及NK细胞功能。
【关键词】：胸腺五肽；烧伤；流式细胞术；免疫调节
烧伤被世界卫生组织确定为世界医学界十大疑难病症之一。大量研究表明，严重烧伤后病人的免疫功能下降，以T淋巴细胞免疫功能障碍为主。烧伤后，机体细胞免疫功能降低，与全身严重感染和多脏器功能衰竭的发生和发展有着密切关系，而全身严重感染和多脏器功能衰竭的发生和发展是导致特重烧伤病人死亡的两个主要原因。因此，采取积极有效的免疫制剂治疗特重烧伤成为烧伤治疗的重要方案。胸腺五肽(Thymopentin，Tp-5)是胸腺生成素Ⅱ第32～36位的氨基酸残基片段(精-赖-天冬-缬- 酪)，但保留了胸腺生成素生物学活性，具有和胸腺提取物胸腺素和胸腺肽相同的生理功能和药效。为探讨胸腺五肽对特重烧伤病人细胞免疫的影响，笔者采用流式细胞计数仪(FCM)动态监测经TP．5治疗的烧伤病人的外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞数的变化。
1 材料与方法
1．1 临床资料根据 1970年全国烧伤会议制定的烧伤严重程度分类标准，选择2004年7月至2004年12月入院治疗40例成年严重烧伤病人，将其随机分为两组(见表1)。有其他全身性疾病、肿瘤及妊娠期妇女不进入本研究，合并有其他部位严重复合伤者也未入选。
治疗组从伤后第2天起接受TP-5(海南中和制药有限公司生产)治疗，每日1 rng，肌肉注射，疗程20天；对照组不给予TP-5治疗，其余治疗两组病人基本相同。两组病人分别于伤后第5、10、17、22天抽取外周静脉血2 ml。
1．2 检测试剂与器材 ①三色直标单克隆抗体：鼠抗人CD3+、CD4+、CD8+ (美国BD公司)；②双色直标单克隆抗体：鼠抗人CD3／CD15+CD56(美国BD公司)；③FACS Calibur FCM(美国BD公司)。
1．3 检测指标与方法 不同时间抽取病例外周静脉血，检测单核细胞中T淋巴细胞总数(CD3+)，T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)以及NK细胞数。按以下方法进行：
1．3．1 取专用试管4支，依次加入Ig /IgG2/IgC3(对照)、CD3/CD4/CD8三色直标单抗体2o 及ED—TA抗凝血100 ul混匀。
1．3．2 置暗处室温孵育30 min。
1．3．3 每管加溶血素2 ml，充分混匀，准确暗处放置10 min。
1．3．4 15，000 r/min离心5 min。
1．3．5 弃上清，每管分别加入涤3次。
1．3．6 弃上清，每管加入PBS 5OOul将沉淀悬浮，上机测定。
1．3．7 采用BD公司的Cell Quest软件进行测定和分析，每次获取104个细胞。
1．4 统计学处理结果 以 ±s表示，采用t检验进行统计分析。
2 结果
对照组和治疗组不同时间外周静脉血中T淋巴细胞亚群及NK细胞的结果见表2(略)、表3(略)。
伤后第2天两组病人T淋巴细胞亚群及NK细胞数无显著性差异(P>0．05)。伤后第5、10、17、22天两组病人T淋巴细胞总数有显著性差异(P<0．05)，对照组CD8+细胞显著高于治疗组，有显著性差异(P<0．05)，其比值CD4+/CD8+ 显著低于治疗组，第5、10天两组比值有显著性差异(P<0．05)，第17、22天两组比值有极显著性差异(P<0．01)。
3 讨论
大量研究表明，严重烧伤可导致机体免疫功能下降，主要以细胞免疫功能降低为主，T淋巴细胞表现功能缺陷，数量减少，而T淋巴细胞的减少可影响抗体形成细胞功能。T淋巴细胞功能障碍主要表现为T淋巴细胞亚群CD8+细胞增多、CD4+/CD8+比值减少，且在伤后两周为明显，呈倒置现象。本研究结果支持上述论断。T淋巴细胞中的CD4+/CD8+比值代表整体的免疫平衡，它们之间有一定比例，以保持适度的免疫应答，如果T淋巴细胞亚群比例失调，则导致细胞免疫功能紊乱。特重烧伤后T淋巴细胞亚群变化的原因较复杂，主要与以下因素有关：烧伤后产生的“烧伤毒素”、“血清不明蛋白”是激活机体产生各种体液因子引起免疫功能低下的重要物质【8,10 ；烧伤时应激反应导致机体免疫能力下降；延误复苏，可加重烧伤出现的T淋巴细胞亚群异常；烧伤治疗中使用的某些抗菌素可抑制细胞免疫。在特重烧伤的临床综合治疗中，积极有效的免疫治疗是减少并发症、进一步提高治愈率的有效手段。目前，国内外学者均在寻找一种理想的免疫调节剂。TP-5是胸腺生成素Ⅱ第32~36位氨基酸残基片段，具有胸腺生成素Ⅱ的全部生理功能，即双向调节免疫系统功能。笔者给予特重烧伤病人11P一5免疫治疗后，发现11P一5具有降低CD8 细胞数量，提高T淋巴细胞的免疫功能，同时它明显调节CD4+/CD8+比值，使之趋于平衡，使烧伤病人细胞免疫功能得以恢复、提高，减少伤后感染及其它并发症的发生率。TP-5免疫调节的作用机理尚无完全阐明 ，其主要作用是诱导T淋巴细胞分化和与成熟T淋巴细胞特异受体结合，使胞内环磷酸腺苷(CAMP)水平升高介导，从而诱发一系列胞内反应，达到调节免疫功能的作用。最近研究发现TP-5可通过激活包括淋巴细胞在内的单核细胞的蛋白激酶介导细胞分裂增殖，增强细胞免疫功能 ；并能通过阻断应激时的肾上腺皮质激素反应调节应激状态下的机体细胞免疫功能，使CD4+/CD8+ 比值趋于平衡。
本研究在使用TP-5过程中能明显改善和提高特重烧伤病人的免疫功能，且未发现任何毒副作用。笔者认为在烧伤病人的治疗中，11P一5可作为一种良好的免疫调节剂。
参考文献：(略)