■方法:将大鼠随机分为正常对照组、高脂模型组、复方丹参滴丸组、阿托伐他汀组,分组干预4周后,检测血浆总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。应用酶联免疫法测定血小板表面α颗粒膜糖蛋白(CD62P)浓度,应用流式细胞术(FCM)检测血浆α颗粒膜蛋白-140(GMP140)浓度。
■结果:高脂血症组大鼠血浆CHO、LDL-C、CD62P及GMP140水平明显升高,复方丹参滴丸组和阿托伐他汀组GMP140及CD62P水平显著降低。
■结论:高脂血症大鼠血小板活化程度高,复方丹参滴丸具有与阿托伐他汀效果相似的抑制高脂血症大鼠血小板活化作用。
高脂血症是心脑血管疾病的重要危险因素。在血液黏度升高、血栓形成及动脉粥样硬化发生发展过程中,血小板活化起重要作用。血小板表面CD62P及血浆GMP140水平反应血小板活化功能,是血小板活化的标志物。本文通过对高脂血症大鼠血小板功能变化及复方丹参滴丸的干预研究,评价了复方丹参滴丸对于高脂血症大鼠血小板功能的影响,以期对临床有所帮助。
材料与方法
选取威斯特(Wistar)大鼠44只,适应性饲养1周后随机分组,正常对照组(常规饲料喂养)10 只,高脂饲料组34只。高脂饲料配方为: 2%胆固醇、0.35%胆酸钠、0.3%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%猪油、82.35%基础饲料。4 周后高脂血症大鼠模型制造成功,将其随机分为高脂对照组(14只)、复方丹参滴丸组(10只)、阿托伐他汀组(10只)3组。分别给予高脂饲料、复方丹参滴丸160 mg /(kg·d)、阿托伐他汀10 mg /(kg·d)。除正常对照组外继续高脂喂养。
分组喂养前及药物干预4周后,经大鼠内眦静脉取血进行血脂分析、CD62P流式细胞仪( FCM)检测及GMP140酶联免疫测定。血脂分析指标包括CHO、TG、HDL-C和LDL-C等4项指标。
结果
基础体重及血脂水平分析
高脂喂养前,常规饲料组与随机抽取的10只高脂饲料组大鼠体重、血脂等指标相似,基础资料具有可比性(表1)。
高脂喂养4周后血脂水平分析
高脂喂养4周后,取常规饲料组大鼠和随机抽取的16只高脂饲料组大鼠进行血脂检测,其CHO、TG、LDL-C水平均明显升高、HDL-C/CHO比值明显降低,提示大鼠高脂模型成功建立(表2)。
复方丹参滴丸干预组血脂水平、血浆GMP140及血小板表面CD62P水平分析
药物干预4周后,正常对照组、高脂对照组、复方丹参滴丸组、阿托伐他汀组TG及HDL-C水平未见明显差异(P>0.05),高脂对照组CHO、LDL-C水平最高,HDL-C/CHO比值最低,GMP140、CD62P水平最高,提示高脂对照组血小板活化程度最高。阿托伐他汀组血脂指标明显改善的同时, GMP140、CD62P水平也明显降低。复方丹参滴丸组CHO、LDL-C、HDL-C/CHO与高脂对照组相比有改善的趋势,但尚无统计学显著性,GMP140、CD62P水平显著下降(表3)。
与高脂对照组相比,复方丹参滴丸组与阿托伐他汀组GMP140、CD62P水平均明显降低,且两组之间无显著差异。复方丹参滴丸及阿托伐他汀组的CD62P水平与正常对照组相似,表明复方丹参滴丸与阿托伐他汀组干预效果相似。
表1 常规饲料组与高脂饲料组体重及血脂基础水平比较([X±s])
| 指标 | 常规饲料组(n=10) | 高脂饲料组(n=10) | t | P |
| 体重(g) | 288.400±11.800 | 291.700±11.900 | 0.388 | 0.702 |
| CHO(mmol/L) | 1.744±0.261 | 1.851±0.291 | 0.866 | 0.398 |
| TG(mmol/L) | 1.740±0.530 | 1.862±0.523 | 0.518 | 0.611 |
| LDL-C(mmol/L) | 0.215±0.074 | 0.211±0.058 | 0.135 | 0.894 |
| HDL-C(mmol/L) | 1.471±0.264 | 1.544±0.220 | 0.672 | 0.510 |
表2 常规饲料组与高脂饲料组分组喂养4周前后血脂水平分析([X±s])
| 指标 | 常规饲料组(n=10) | 高脂饲料组(n=16) | t | P |
| CHO(mmol/L) | 1.922±0.269 | 10.527±1.683 | -11.253 | 0.000 |
| TG(mmol/L) | 0.348±0.057 | 0.878±0.478 | -2.667 | 0.015 |
| LDL-C(mmol/L) | 0.318±0.024 | 8.655±1.858 | -10.820 | 0.000 |
| HDL-C(mmol/L) | 1.672±0.228 | 2.596±0.354 | -5.910 | 0.000 |
| HDL-C/CHO | 0.871±0.044 | 0.247±0.043 | 30.229 | 0.000 |
表3 复方丹参滴丸组血脂水平及血小板活化功能分析([X±s])
| 组别 | n | CHO(mmol/L) | LDL-C(mmol/L) | HDL-C/CHO | GMP140(μg/L) | CD62P/CD61(%) |
| 正常对照组 | 10 | 1.846±0.196 | 0.164±0.031 | 0.583±0.062 | 10.655±1.682 | 10.089±1.333 |
| 高脂对照组 | 13 | 13.779±5.219 | 10.680±4.727 | 0.195±0.079 | 27.045±2.849 | 25.169±5.324 |
| 阿托伐他汀组 | 9 | 7.053±2.631 | 4.659±2.279 | 0.312±0.075 | 13.371±1.555 | 9.983±1.036 |
| 复方丹参滴丸组 | 9 | 10.927 ±4.160*# | 8.081 ±3.532*# | 0.239 ±0.053*# | 13.999 ±1.345*Δ | 10.476 ±1.050Δ |
注:与正常对照组比较 *P<0.05;与高脂对照组比较 ΔP<0.05;与阿托伐他汀组比较 #P<0.05。
讨论
血脂异常、血小板活性增加与血管阻塞性并发症危险密切相关,在降脂的同时降低血小板活性对于血栓性疾病的临床治疗和预防心脏事件发生有十分重要的意义。GMP140以血小板膜CD62P和血浆GMP140两种形式存在,是反映血小板活化的特异性标志物。在血栓形成过程中, GMP140起始动作用,使血小板与中性粒细胞粘附、聚集,形成血栓。FCM检测CD62P表达是评价血小板活化功能较为准确的方法。
本研究显示,高脂血症大鼠血浆GMP140 水平和血小板CD62P表达明显增加,也说明高脂血症状态可促进血小板的活化。虽然复方丹参滴丸没有明显降低血脂水平的作用, 但能够显著降低高脂血症大鼠CD62P及GMP140水平,而且降低的程度与阿托伐他汀相似,说明复方丹参滴丸抑制血小板活化的作用与血脂水平无关。
不稳定型心绞痛(UA)患者体内存在血小板活化及纤溶活性异常,表现为GMP140水平升高、组织型纤维蛋白溶酶原激活物(t-PA)活性降低、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)活性升高。复方丹参滴丸能使UA患者GMP140含量明显降低,t-PA活性明显升高,提示复方丹参滴丸能有效抑制血小板活化反应,改善纤溶活性。有研究表明,复方丹参滴丸对血小板聚集的抑制作用基本等同甚至优于阿司匹林,而其临床不良反应较阿司匹林少。
(参考文献备索)