王红艳，钟雪云，刘致中，詹美意
 
【摘要】目的：研究人尿萃取物尿多酸肽（CDA-Ⅱ）对人胶质瘤细胞SWO-38 增殖及分化的影响。方法：体外实验采用MTT法、集落形成试验检测CDA-Ⅱ对SWO-38细胞存活与集落形成的影响，体内实验利用裸鼠移植瘤试验观察CDA-Ⅱ抗胶质瘤生长的作用。HE染色观察尿多酸肽作用后SWO-38的形态学改变。结果：SWO-38 经1～5mg/ml 尿多酸肽处理3天后，细胞增殖抑制率为39.49%±5.27%～65.05±5.89%，尿多酸肽的IC50为2.52mg/ml；0.3~2.1mg/ml尿多酸肽处理SWO-38 10天后,集落形成抑制率为23.45%±0.62%～96.22%±1.01%，IC50为1.03mg/ml。这种抑制效应呈剂量依赖性。经腹腔注射给药28天后，见高低剂量尿多酸肽均可显著抑制裸鼠体内SWO-38增殖,抑瘤率为79.94%、47.77%（P＜0.05，n=10）。 尿多酸肽诱导SWO-38出现细胞分化的形态学改变。结论：尿多酸肽对人胶质瘤细胞SWO-38有较好的抗瘤作用，是很有潜力的天然抗胶质瘤药物。
 
  神经胶质瘤是神经系统最常见的原发恶性肿瘤， 约占颅内肿瘤的35.26%~60.96%。令人遗憾的是，至今对胶质瘤的治疗尚无突破性进展，胶质瘤患者平均生存期为6个月，综合治疗生存期不足2年。因此，寻求高效低毒的抗肿瘤药物是治疗胶质瘤的迫切问题。近年来天然药物以毒性低、安全范围广、药源丰富越来越受到人们的关注，已成为肿瘤治疗领域的一大特色。尿多酸肽是从健康人尿中分离提纯的一组天然活性成分的生物制剂,实验证明尿多酸肽对多种癌细胞有明显抑制生长和诱导分化的作用,但在胶质瘤中的研究少见报道。本实验在人胶质瘤细胞SWO-38与裸鼠移植瘤动物模型上，观察了尿多酸肽抗人胶质瘤作用，以期为尿多酸肽的临床应用提供实验依据。
 
讨论 
  胶质瘤是颅内肿瘤中最常见的恶性肿瘤。由于胶质瘤自身存在浸润性生长和易复发的生物学特征，加之传统化疗药物的细胞毒性、多药耐药性及不易通过血脑屏障的局限性，迄今仍不能完全改变这一致命肿瘤的自然转归。 从天然药物中寻求高效低毒的抗肿瘤活性成分是肿瘤药物研制与开发的热点。尿多酸肽是从新鲜健康人尿中提纯的一组天然代谢产物。作为一种新型抗肿瘤药物，已在日本、美国和我国台湾地区用于多种晚期恶性肿瘤的患者。国内文献报道尿多酸肽对消化道肿瘤、肺癌、乳腺癌、胶质瘤等多种恶性实体瘤有一定疗效，能明显缓解临床症状，不良反应小，并改善晚期恶性肿瘤患者的生活质量。动物实验发现尿多酸肽可明显抑制裸鼠人肝癌切除后的切缘复发和肝内外转移。 虑及尿多酸肽对胶质瘤患者的可观疗效，我们进行了尿多酸肽抗胶质瘤的实验研究，结果发现尿多酸肽在体内外均可以显著抑制胶质瘤SWO-38细胞增殖,细胞形态学改变提示尿多酸肽能诱导胶质瘤细胞分化。
 
 对肿瘤细胞增殖的抑制作用是筛选抗瘤药物的基本指标。我们首先在体外采用MTT法与集落形成试验均观察到尿多酸肽对胶质瘤SWO-38 细胞增殖有明显抑制作用，而且这种抑制效果在一定范围内随尿多酸肽浓度的增高而增强，呈剂量依赖关系。但两种方法得到的尿多酸肽IC50有一定差别，原因可能在于：一是试验方法本身有差异，如接种细胞密度有别，药物作用时间也不相同；另是二者所观察的指标不同，前者检测细胞存活与生长，后者定量分析单细胞增殖潜能。在体内我们利用裸鼠移植瘤动物模型，观察了尿多酸肽对胶质瘤细胞SWO-38 增殖的抑制作用。结果显示：较对照组而言，高低剂量的尿多酸肽均能有效地抑制裸鼠移植瘤的生长，而且高剂量组抑瘤率明显大于低剂量组。我们从裸鼠在实验前后的体重变化发现，尿多酸肽无明显不良反应。在给药期间，裸鼠食欲良好，活动自如，毛发光泽，无不良反应。这也表明了尿多酸肽具有良好的抗胶质瘤作用。通过HE 染色我们观察到，经尿多酸肽处理后SWO-38细胞形态发生了特征性改变:细胞伸展变扁，胞浆增多，胞核变小，核浆比减小，突起增多而且细长。 由于正常星形胶质细胞具有明显区别于肿瘤细胞的形态学特征，形态学变化可以作为一个易于观察而且敏感的分化指标。所以这些结果表明尿多酸肽可诱导SWO-38细胞向成熟的星形细胞分化。 我们在以往研究发现，尿多酸肽可降低肝癌细胞的凋亡阈值， 增强三氧化二砷对肝癌细胞的凋亡效应，二者有协同作用。本实验观察到尿多酸肽对胶质瘤SWO-38 细胞的凋亡效应并不明,而主要表现是尿多酸肽逆转SWO-38细胞恶性表型,使其趋于成熟分化。目前尿多酸肽诱导胶质瘤分化的确切作用机制尚未明确。Lin等在鼠体内实验中发现，尿多酸肽能清除自由基和抑制脑中脂质过氧化反应，而发挥抗氧化损伤作用。由于自由基可作为细胞内重要的第二信使。通过影响细胞内Ca2+稳态、蛋白质磷酸化和信号的级联传递、转录因子的激活等细胞信号传导过程中的多个靶位点，参与细胞增殖、分化。提示通过清除自由基来调控细胞信号传导和基因表达可能是尿多酸肽诱导细胞分化的作用机制之一。
 
 综上所述，尿多酸肽有良好的抗胶质瘤作用，是一种很有前景的诱导分化剂。但要广泛开辟其应用，还有待进一步从基因水平揭示尿多酸肽诱导分化的分子机制。