恶性肿瘤是继心脑血管疾病之后发病率和病死率均很高的疾病。目前常用的外科手术、化学疗法和放射疗法存在患者痛苦及严重不良反应多的缺点。肿瘤免疫治疗是通过增强机体抗肿瘤免疫防御反应而产生抗肿瘤作用,疗效好、不良反应小是应于肿瘤治疗的主要优势[卜。多糖类是一种重要的免疫增强剂,目前国内外临床上许多多糖类药物用于恶性肿瘤的治疗[3J。银耳孢糖(tremellapolysaccharide)系银耳科植物银耳(TremellafuciformisBerk.)经深层发酵并经分离纯化而得的银耳多糖。文献[4]报道腹腔注射银耳多糖对荷Sl80肉瘤小鼠肿瘤生长有明显抑制作用,作者对口服银耳孢糖的抗肿瘤的作用进行深入研究。 |
1材料
银耳孢糖(以下简称TP,锦州永昌医药开发有限公司,用时以质量分数为0.5%的CMC-Na溶液混悬),注射用环磷酰胺(以下简称CTX,上海华联制药有限公司)。
昆明种小鼠[雄性,体质量18~22g,沈阳药科大学实验动物中心提供,动物合格证号:SCXK(辽)2003—008],C57BL/6小鼠[雄性,体质量18~22g,购自中国军事医学科学院,动物合格证号:SCXK一(军)2002—001]。小鼠肝癌H22瘤株(中国医科大学肿瘤研究所提供),Lewis肺癌瘤株(军事医学科学院提供)。
2方法
2.1肿瘤模型的制备
按照文献[5]方法,取腹腔接种H22细胞的小鼠,在超净台上无菌操作取出腹腔内腹水。用生理盐水调整细胞密度至2×10加个/L。每只小鼠于其右前肢腋下皮下接种细胞悬液0.2mL。取接种14d的Lewis肺癌荷瘤小鼠,脱颈处死,放入体积分数为75%的酒精溶液浸泡消毒,在超净工作台上分离瘤体,取生长良好、无坏死的肿瘤组织。用生理盐水洗净后剪碎。加生理盐水研磨,过50m尼龙网制成单细胞悬液,用生理盐水调整细胞密度至2.5×10个/L,台盼蓝染色示活细胞数>95%,每只小鼠右腋皮下接种0.2mLLewis肺癌细胞悬液,建立Lewis肺癌腋皮下接种模型。
2.2银耳孢糖单独使用的抗肿瘤作用
接钟瘤鼠随机分组,每组10只。其中空白对照组于接种后24h开始每日灌胃CMC-Na;阳性对照组于接种后第24h开始隔日腹腔注射CTX(20mg·kg-1);给药组于接种后24h开始每日灌胃银耳孢糖(50、100、200mg·kg)。以上各组给药均持续到接种后第7天,每日记录小鼠体质量。于末次给药后24h处死动物,剥离肿瘤称其质量,计算抑瘤率。
抑瘤率=(1一给药组平均瘤质量/对照组平均瘤质量)×100%。
2.3银耳孢糖与环磷酰胺联合使用的抗肿瘤作用
接种H22细胞小鼠随机分组,每组10只。空白对照组每日灌胃CMC-Na;TP组于接种后24h开始每日腹腔注射TP(50mg·kg);银耳孢糖联合CTX组于接种后24h开始每日上午灌胃银耳孢糖(50mg·kgI1),下午腹腔注射CTX(5、10、20mg·kgI1);CTX组于接种后第24h开始隔日腹腔注射CTx(5、10、20mg·kg)。每日记录小鼠体质量。以上各组给药均持续到接种后第7天。于末次给药后24h处死动物,剥离肿瘤称其质量,计算抑瘤率。
2.4统计方法
试验结果表示为±S,组间差异性统计选用双侧t一检验。
3结果
3.1银耳孢糖单独使用的抗肿瘤作用结果见表1、2。银耳孢糖(25、50、100mg·kg)单独使用可剂量依赖性地抑制小鼠肝癌H22和Lewis肺癌肿瘤的生长,抑瘤率均大于35%;在产生抗肿瘤作用剂量范围内,银耳孢糖对受试动物体质量增长无明显影响。CTX(20mg·kg)也可明显制肝癌H22和Lewis肺癌肿瘤的生长,但给予CTX后动物体质量增长明显低于对照组(结果未显示)。
3.2银耳孢糖与环磷酰胺联合使用的抗肿瘤作用
结果见表3。银耳孢糖(50mg·kg)与环磷酰胺(5、10、20mg·kgI1)联合使用时,抑瘤率分别为58.2%、70.5%和76.0%,明显大于银耳孢糖(50mg·kg)或环磷酰胺(5、10、20mg·kgI1)单独使用时的抑瘤率。给予环磷酰胺(5、10、20mg·kgI1)可使动物体质量增长缓慢,同时应用银耳孢糖(50mg·kg)对环磷酰胺所致动物体质量增长减慢有缓解作用(结果未显示)。
4讨论
近百年研发调节免疫力产品的过程中,人们发现植物中的活性多糖可调节人体免疫力J。在众多活性多糖物质中,最令人瞩目的要数真菌多糖。真菌多糖是一类具有广泛药理活性,功效十分显著的活性物质。真菌多糖来自天然,广泛存在于灰树花、香菇、黑木耳、灵芝、茯苓、蘑菇和猴头菇等天然食用菌中。本文作者研究证明银耳孢糖对多种动物肿瘤模型有明显的抑制肿瘤生长作用。给药后对动物体质量影响的实验结果表明:在产生抑瘤作用的同时对受试动物的体质量增长无明显影响,表明银耳孢糖无明显不良反应,与常规化疗药物相比具有明显优势。
临床上治疗恶性肿瘤通常采用几种化疗药物合用的给药方案。文献[4]报道,银耳多糖具有明显的免疫增强和增加外周血白细胞作用,因而作者考察了银耳孢糖与常用化疗药物合用的抗肿瘤作用,证明银耳孢糖与环磷酰胺合用可产生明显的协同作用,并可恢复动物体质量的正常增长,具有明显的减毒增效作用。