| 【摘要】 目的 对硫辛酸注射液进行细菌内毒素检查研究，建立检测硫辛酸注射液中内毒素的试验方法。方法 采用《中国药典》2000年版附录细菌内毒素检查法。结果 硫辛酸注射液用鲎试剂检查其细菌内毒素并无干扰因素的影响。结论 用细菌内毒素检查法检查硫辛酸注射液中内毒素是可行的。
【关键词】 硫辛酸注射液；细菌内毒素检查法；鲎试剂；干扰试验
【Abstract】 Objective To establish bacterial endotoxin test for thioctic acid injection using limulus lysate agent. Methods The maximum valid dilution (MVD) was determined according to inhibition test, the bacterial endotoxin test was based on the method from Chinese pharmacopeia 2000 edition.Results Thioctic acid injection has no interference to the bacterial endotoxin. Conclusion The results suggest that the bacterial endotoxins test is suitable for the detection of endotoxin in thioctic acid injection.
【Key words】 thioctic acid injection; bacterial endotoxins test; limulus lysate reagent; interfere test
α- 硫辛酸是在人全身细胞中存在的脂肪酸，担任的任务是让细胞活化，也就是俗称的抗氧化物质。它可以降低神经组织的脂质氧化现象，阻止蛋白质的糖基化作用；且可抑制醛糖过原酶，因而可阻止葡萄糖或半乳糖转化成为山梨醇。α -硫辛酸可以防止糖尿病、控制血糖及防止因高血糖造成的神经病变，所以被大量用于治疗糖尿病的神经病变上。德国史达德药厂生产的“奥力宝”就是种用于治疗糖尿病合并症的药物，对该药物的细菌内毒素检查方法还未有一确定的标准，我们对该药物的细菌内毒素检查方法进行了确证，报告如下。
1 试验材料
1.1 主要仪器 德国ＩＫＡ公司－ＭＳI型旋涡振荡器，英国Grant公司SUB14型四孔恒温水浴箱。所有玻璃器皿用具均经 250℃干烤至少1h以去除外源性内毒素。
1.2 主要试剂 两批硫辛酸注射液由德国史达德大药厂提供（商品名为“奥力宝”），批号分别为1524、2141，鲎试剂分别由两个厂家即湛江安度斯和海洋公司提供，具体标示量和批号见下述，内毒素标准品由中国药品生物制品检定所提供，批号为2004-2，规格160Eu/支。细菌内毒素检查用水由湛江安度斯公司提供，批号为0402190，规格50ml/瓶。
2 试验方法和结果
2.1 供试品细菌内毒素限值 (Ｌ)的确定 由生产厂家提供，规定限值为小于1.8Eu/ml。
2.2 鲎试剂灵敏度复核 按《中国药典》2000年版二部附录ＸＩＥ的方法进行［1］。见表1。表1 鲎试剂灵敏度复核结果可见复核结果均在 0.5λ～ 2.0λ(包括 0.5λ和 2.0λ)，所用的鲎试剂其灵敏度均符合规定。
2.3 硫辛酸注射液干扰试验预试验
2.3.1 有效稀释度的计算 根据最大稀释度公式的计算：MVD＝CL/λ，该样品限度L为小于1.8Eu/ml。目前市面上所用的鲎试剂的灵敏度λ有0.5、0.25、0.125、0.06、0.03Eu/ml。在使用上述鲎试剂的时候，最大稀释倍数应为小于：1.8/0.5=3.6、1.8/0.25=7.2、1.8/0.125=14.4、1.8/0.06=28.8、1.8/0.03=57.6倍。
根据以上，我们在本试验中确定3.5倍、7倍、14倍、28倍、56倍为样品的有效稀释倍数。
2.3.2 试验操作 将样品原液用细菌内毒素检查用水分别稀释为3.5倍、7倍、14倍、28倍、56倍的溶液，记此系列溶液为NPC。同时在上述供试品溶液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的溶液中均含有2λ浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。
取灵敏度为0.25Eu/ml的两个不同厂家的鲎试剂，分别与上述PPC和NPC溶液进行反应，每一浓度重复两管，结果见表2。表2 硫辛酸注射液干扰试验预试验结果结论：本品硫辛酸注射液两批，用两个厂家的鲎试剂，进行干扰试验预试验结果显示，需对样品稀释14倍以上对试验无干扰。
2.4 硫辛酸注射液正式干扰试验 两批样品均稀释28倍作为供试溶液，对应的鲎试剂灵敏度为0.06Eu/ml。见表3。表3 硫辛酸注射液干扰试验正式试验结果结论：本品两批，稀释28倍后作为供试液，用两个厂家的鲎试剂进行干扰试验，结果其Es值均在0.5～2.0λ之间，Et值均在0.5～2.0Es之间，表明此样品的28倍稀释液对细菌内毒素试验无干扰作用。
2.5 硫辛酸注射液的细菌内毒素检查 取本品两批，稀释28倍作为供试溶液，分别用λ=0.06ＥＵ/ｍＬ的鲎试剂按《中国药典》2000年版细菌内毒素检查法检查，结果均符合规定，即这两批硫辛酸注射液中细菌内毒素的含量均小于1.8Eu/ml。见表4。表4 硫辛酸注射液细菌内毒素检查结果
3 讨论
细菌内毒素检查法与热原检查法比较具有操作简单、快捷、准确、成本底等优点。本试验取供试品两批，根据其规定细菌内毒素限值1.8Eu/ml，按最大有效稀释倍数稀释至28倍，并应用了两个厂家的鲎试剂进行细菌内毒素检查的干扰试验，结果无干扰作用，表明用细菌内毒素检查法检查硫辛酸注射液中内毒素是可行的。
【参考文献】
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