Experimental Study on Treatment of Endometriosis with Zheng Jia Oral Liquid

Yang Yaofang,Wang Qinmao,Fang Xueming,et al

　　Implanted tunica intima method was used to develop animal model of endometriosis,and therapeutic effect of Zheng Jia Oral liquid was observed and compared with that of danazol. Radioimmunoassay was adopted for determination of plasma prostaglandin F2α(PGF2α) level and enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) was used for detection of serum endometrium antibody(EMAb), double antibody radioimmunoassay for determination of estradiol(E2) and pregnendione(P) levels in rats.Results indicated that Zheng Jia Oral Liquid could decrease plasma PGF2α,serum E2 and P levels;positive rate of EMAb was 0%.There were significant differences(P＜0.05 or P＜0.01) as the drug treatment groups compared with the model group.It is suggested that Zheng Jia Oral Liquid is effective for treatment of endometriosis(EMT),and changes of plasma and serum PGF2α,EMAb,E2 and P levels can be served as monitoring indexes of EMT diagnosis and treatment.

　　Key words:Endometriosis/TCM therapy @Zheng Jia Oral Liquid

　　子宫内膜异位症(Endomtriosis，EMT)是妇科常见病，近年来发病率有上升的趋势，因常与不孕同时存在，已引起医学界的普遍关注。目前对EMT尚缺乏敏感的实验室诊断及监测方法，本文应用放射免疫方法及酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定大鼠血浆前列腺素F2α(PGF2α)水平；血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平和血清中抗子宫内膜抗体(EMAb)水平，探讨4者在EMT诊断和治疗中的应用价值，并观察症瘕口服液在改善这些指标方面的作用。现报告如下。

　　1　材料与方法

　　1.1　试剂与药品：PGF2α放免试剂盒由中国医学科学院基础所药理室提供；EMAb试剂盒(ELISA法)由南京军区总医院临床免疫科提供；血清E2和P放免试剂盒均由中美合资天津九鼎医学生物工程有限公司提供；丹那唑胶囊，上海市华联制药公司生产，批号950302；口服液由丹参、水蛭、土鳖虫、生大黄、莪术、菟丝子、淫羊藿、生牡蛎等中药组成，安徽中医学院药剂教研室提供。

　　1.2　仪器：FJ-2107液体闪烁计数器和125I-放免测定仪，西安262厂生产。

　　1.3　动物：健康未孕Wistar大鼠，体重135±15g，由安徽医科大学实验动物中心提供。

　　2　方法

　　2.1　子宫内膜异位症动物模型制作：于造模前连续2天在大鼠皮下注射己烯雌酚0.1mg/kg，腹部脱毛。用30mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，腹部皮肤常规消毒，沿腹中线剪开腹壁和腹膜(切口大约为3cm)，找到子宫左侧，在离卵巢约1cm处，分离附着于子宫肌壁的脂肪和结缔组织后，两头分别用手术线结扎，剪取中间约1.5cm一段子宫体置于盛生理盐水的培养皿中，剥去其外膜，缝在右侧子宫距卵巢1cm处，缝时缝针不得穿透子宫右侧浆膜层，然后剪开筒状子宫，使之内膜暴露，最后缝合切口，术毕后将动物分笼单放，让其自然苏醒。每鼠每天腹腔注射庆大霉素0.1ml，连续1周，假手术对照组的大鼠只用镊子牵拉子宫，其余处理同上。

　　2.2　分组及给药：3周后，将大鼠随机分为5组：假手术对照组，症瘕口服液低剂量组3.9g/kg,高剂量组14g/kg,治疗对照药丹那唑组0.18g/kg和EMT模型组,按1.2ml/100g体重灌胃给药，每日1次。假手术对照组与EMT模型组给等容量溶媒(1ml丙二醇，加0.06g苯甲酸钠，加62ml蒸馏水)，连续3周。末次给药后用20%乌拉坦1.5g/kg腹腔注射麻醉［1］,腹主动脉抽血检测各项指标，取异位内膜组织送病理组织学检查。

　　2.3　测定方法：血浆PGF2α测定采用放射免疫法；血清EMAb测定采用ELISA法，试验在聚苯乙烯反应板上进行，终止反应后测492nm波长吸光度A值；血清E2、P测定采用双抗体放射免疫法，用γ-计数器测定各管沉淀物的放射性强度。具体操作按试剂盒要求进行。

　　2.4　病理组织学检查：取上述抽血后的大鼠，立即解剖观察其异位内膜及周围子宫，取其标本，经常规制片，HE染色，光镜观察。

　　3　结果

　　3.1　对大鼠血浆PGF2α水平的影响：EMT模型组大鼠血浆中PGF2α水平明显高于假手术对照组，而症瘕口服液的高、低剂量组和丹那唑组PGF2α水平明显低于假手术对照组(P均＜0.01)。见附表。

　　3.2　对大鼠血清EMAb影响：EMT模型组大鼠血清EMAb阳性率为90.91%(10/11)，假手术对照组与症瘕口服液高剂量组、丹那唑组均无EMAb阳性者，症瘕口服液低剂量组阳性率为20%(2/10)。说明症瘕口服液能降低EMAb水平，随剂量增加作用增强。

　　3.3　对大鼠血清E2、P水平的影响：EMT模型组大鼠血清E2和P水平明显高于假手术对照组，而用药各组均能降低EMT模型大鼠血清中E2和P水平(P＜0.05或P＜0.01)。见附表。

附表　各组大鼠血浆PGF2α、血清EMAb、E2、P水平比较(±s)

组别	PGF2α(pg/ml)	E2(pg/ml)		P(ng/ml)
假手术对照组	288.57±22.48(8)**		12.90±0.27(8)**	29.53±4.04(8)**
EMT模型	637.77±44.59(8)		14.42±0.32(8)	44.18±8.62(8)
症瘕口服液
低剂量组	406.52±23.83(9)**		13.56±0.76(8)**	33.97±6.91(8)*
高剂量组	344.33±29.17(9)**		13.28±0.43(8)**	31.59±2.74(8)**
丹那唑组	317.08±29.55(8)**		13.11±0.40(8)**	32.63±5.64(8)**

与EMT模型组比较, *P＜0.05，**P＜0.01； 括号中数字为鼠数3.4　病理组织学检查：EMT模型组的异位内膜中腺腔极度扩大，有乳头状突起、腺上皮呈柱状或立方形。假手术对照组无异常病变。症瘕口服液高剂量组异位内膜组织中内膜腺体数减少，腺上皮萎缩，在萎缩程度上与丹那唑组相比，差异不明显。说明用药组具有抑制内膜腺体生长的作用。

　　4　讨论

　　用大鼠制作EMT模型的同时，用药物治疗并检测上述各项指标，作为评价药物疗效的方法。探讨了这4项指标EMT诊断与治疗中的应用价值。EMT患者腹腔内大量的子宫内膜蛋白质可能导致体液或细胞介质的自身免疫反应，已经发现在EMT患者的血清及腹腔液中有EMAb存在［2］，EMAb与其它自身抗体不同，是EMT患者的标志抗体，用于EMT的诊断特异性较高，同时ELISA方法敏感性较高，既可作为诊断EMT的客观指标之一，也可作为治疗观察［3］。

　　DAN(17α-乙炔睾酮异构衍生物)20世纪70年代开始在国外用于治疗EMT，它能降低血清E2和P水平，造成低雌激素状态，使异位内膜失去激素周期性变化，导致内膜萎缩［4］。其消退异位病变效果肯定，但因肝功能等方面的不良反应［5］，已影响了该药在临床上的进一步使用。

　　症瘕口服液是由水蛭、土鳖虫、生大黄、莪术、菟丝子、淫羊藿、丹参、生牡蛎等中药组成。水蛭的主要成分水蛭素有抗凝作用，能使体内瘀血分解消散，土鳖虫具有活血化瘀止痛及抗缺氧作用［6］，淫羊藿对异常升高的血浆前列腺素有一定的降解作用。该药治疗EMT，在于对异常升高的PGF2α的降解，中和EMAb及降低E2、P水平,从而抑制了异位内膜的生长。丹参、莪术可通经、消瘀；生牡蛎消症散结。由于子宫内膜异位症属中医“痛经”、“症瘕”、“月经不调”及“不孕”范畴。中医认为，若七情抑郁，劳伤气血或风寒相搏，使瘀血阻滞，离经之血积聚日久成为症瘕。此方集化瘀、通络、消症于一体，共同达到疏肝解郁、行气止痛、祛瘀、消症之功,能有效地治疗EMT。

　　参考文献

　　1，杨耀芳，韩启德，邵茂刚，等.等剪切场中剪切诱导血小板释放神经肽Y.中华血液学杂志，1994，15(3)：118-119.

　　2，Chihal HJ,Mathur S,Holtz GL,et al.An endometrial antibody assay in the clinical diagnosis and management of endometriosis.Fertil Steril,1986,46(3):408-411.

　　3，高世光，张敏，邢凌生，等.抗子宫内膜抗体诊断子宫内膜异位症的临床评估.安徽医科大学学报，1996，31(1)：41.

　　4，刘惜时，曹斌融，张惜阴.三苯氧胺与丹那唑对子宫内膜异位症患者血浆激素水平的影响.上海医学，1997，20(1)：32-34.

　　5，Telimaa　S, Apter D, Reinila　 M,et al.　Placebo-controlled

　　comparison of hormonal and biochemical effects of danazol and high-dose medroxyprogesterone acetate.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,1990,36(1～2):97-105.

　　6，杨耀芳,王钦茂,佘则秋,等.土鳖虫总生物碱对动物耐缺氧的影响.中草药,1989,(6):20-21,24