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分类号：R737．11 文献标识码：A 文章编号：1000－467X(2000)01－0088－01▲ 为探讨nm23－H1在肾癌组织中的表达状况，我们采用RT－PCR方法检测25例肾癌及癌周组织中nm23-H1mRNA的表达，并探讨nm23-H1mRNA的表达与肾癌浸润转移的关系。结果报告如下： 1材料和方法 1.1病例资料和组织标本 肾癌患者25例，男19例，女6例，年龄38～74岁，中位年龄56岁。所有病例均经病理证实，其中透明细胞癌22例，混合细胞癌2例，颗粒细胞癌1例。按照Robson分期，Ⅰ期5例，Ⅱ期11例，Ⅲ期5例，Ⅳ期4例。 每份标本为癌组织及正常肾组织各一份，放入液氮中保存备测。 1.2引物序列及合成 根据文献报道［1］合成nm23-H1引物，扩增片断长度为685bp，引物序列如下： 正义：5’GCAGCCGGAGTTCAAACCTAA3’ 反义：5’GCTGGGAGGAAGCATTTTAATC3’ βActin内参照引物一对，扩增片断长度为776bp，引物序列如下： 正义：5’CTATTGGCAACGAGCGGTTC3’ 反义：5’CTTAGGAGTGGGGGTGGCTT3’ 1.3组织总RNA抽提 组织总RNA抽提按德国Qiagen公司RNA抽提试剂盒说明进行。 1.4逆转录合成cDNA 20μl逆转录反应体系包含以下成分：总RNA2μg，AMV逆转录酶20u，4种dNTP(浓度为10mmol/L)2μl，oligodT1μl，Rnasin20u，逆转录酶缓冲液4μl，双蒸水加至20μl。混匀后，42℃反应45分钟，95℃加热5分钟以灭活逆转录酶，放入－70℃冰箱中保存备用。 1.5PCR扩增及电泳、结果判定 25μlPCR反应体系包含以下成分：cDNA2μl，dNTP(2mmol/L)25μl，正、反义引物各25pmol，Taq酶2u，10×PCRbuffer(Mg2＋1.5mmol/L)2.5μl，双蒸水加至25μl。混匀后，加两滴石蜡油置PCR仪上，nm23-H1的反应条件：94℃变性50秒，56℃退火1分15秒，72℃延伸1分30秒，30个循环后再72℃延伸7分钟。β-Actin的反应条件：94℃变性50秒，55℃退火1分15秒，72℃延伸1分15秒，30个循环后再72℃延伸7分钟。其中不加cDNA模板者作为阴性对照。 取PCR扩增产物8μl在1.5％琼脂糖凝胶电泳80伏30分钟，溴化乙锭染色，紫外灯下观察记录照相。根据特异性条带的弱、中等、强，分别记为＋、＋＋、＋＋＋。 1.6统计学处理 采用行×列表的χ2检验。 2结果 2.1nm23-H1mRNA在肾癌及癌周组织表达的差异 25例肾癌组织，nm23-H1mRNA无表达3例，低表达9例，中等表达10例，高表达3例；癌周组织全部表达，其中低表达11例，中等表达11例，高表达3例。两组表达强度无显著性差异(χ2=3.25，P＞0.05)。 2.2nm23-H1mRNA在Ⅰ、Ⅱ期癌及Ⅲ、Ⅳ期癌表达的差异 25例肾癌组织中Ⅰ、Ⅱ期癌16例，nm23-H1mRNA2例无表达，4例低表达，8例中等表达，2例高表达；Ⅲ、Ⅳ期癌9例，1例无表达，5例低表达，2例中等表达，1例高表达。两组表达强度无显著性差异(χ2=2.63，P＞0.05)。 3讨论 nm23基因在低转移细胞株中的表达强度是在高转移细胞株中的10倍，从而认为nm23基因是一个肿瘤转移抑制基因。nm23基因家族包括两个成员：nm23-H1和nm23-H2，其中nm23-H1与肿瘤转移更为密切［2］。 关于nm23基因与肾癌浸润转移之间的关系，国外有较多文献报道，但结论尚不一致。我们采用RT-PCR的方法研究肾癌及癌周nm23-H1mRNA的表达，结果显示，nm23-H1mRNA在肾癌及癌周组织中存在广泛的表达，肾癌及癌周组织中的表达无显著性差异(P＞0.05)，Ⅲ、Ⅳ期晚期癌与Ⅰ、Ⅱ期早期癌的表达无差异(P＞0.05)，说明肾癌的发生与发展与nm23-H1基因无关。nm23基因除与肾癌的转移无关外，研究还发现，在前列腺癌［3］、肺癌［4］、膀胱癌［5］等肿瘤中，nm23并不是转移抑制基因，其表达增高甚至与细胞增殖有关。有观点认为，在一些肿瘤中nm23基因显示抗肿瘤转移作用，可能是与nm23-H1连锁的或附近的一个肿瘤转移抑制基因的作用，而不是nm23-H1基因本身［3］。所以，关于nm23是否为转移抑制基因，还有待于进一步研究证明。 通讯作者：Tel：86－21－56770588－3331 参考文献： ［1］郑晓勇，林芷英，刘银坤，等.原位微环境与nm23-H1、H-rasmRNA及肝癌肝内转移的关系［J］.中华肿瘤杂志，1998，20：15. ［2］Steeg PS,Bevilacqua G,Kopper L,et al.Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatic potential ［J］. J Natl Cancer Inst,1988,80： 200～ 204. ［3］Igawa M,Rukstalis DB,Tanabe T,et al.High levels of nm23 expression are related to cell proliferation in human prostate cencer ［J］. Cancer Res,1994,54： 1313～ 1318. ［4］Bosnar MH,Pavelic K,Krizanac S,et al.Squamous cell lung carcinomas： the role of nm23-H1 gene ［J］. J Mol Med,1997,75： 609～ 613. ［5］Shiina H,Igawa M,Urakami S,et al. Immunohistochemical analysis of the nm23 protein in transitional cell carcinoma of the bladder ［J］. Br J Urol,1995,76： 708～ 713. |
肾癌nm23－H1mRNA表达与浸润转移的关系简介：
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