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喉癌发生发展过程中TRAIL和Survivin蛋白的表达研究

2010-07-30 12:44:58 作者：新特药房来源：中国新特药网天津分站浏览次数：37 文字大小：【大】【中】【小】

简介： 【摘要】探讨喉癌发生发展过程中TRAIL、Survivin蛋白的表达及与喉癌病理特征的关系。方法：采用免疫组化SP法对48例喉癌患者手术后大体标本中喉正常黏膜、不典型增生及浸润癌组织进行检测及分析。结果 ...

关键字：喉肿瘤病理学免疫组织化学肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体凋亡抑制基因

【摘要】
探讨喉癌发生发展过程中TRAIL、Survivin蛋白的表达及与喉癌病理特征的关系。方法：采用免疫组化SP法对48例喉癌患者手术后大体标本中喉正常黏膜、不典型增生及浸润癌组织进行检测及分析。结果：TRAIL蛋白从正常黏膜-不典型增生-浸润癌呈渐进性低表达，而Survivin蛋白则呈渐进性高表达。喉浸润癌组织中TRAIL蛋白的低表达与Survivin蛋白的高表达呈负相关(r=-0.510, P<0.01)。结论：TRAIL和Survivin两种蛋白参与了喉癌的发生发展，两者的表达失调与喉癌发生密切相关。

【关键词】喉肿瘤病理学免疫组织化学肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体凋亡抑制基因

AExpression of TRAIL and Survivin proteins in the carcinogenesis and

development of laryngeal carcinoma

WU Kai, MA Maoqiang， WANG Chunhai, ZHANG Yong

(Department of Patholgy, Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine,

Jinan 250011, Shandong, China)

［ABSTRACT］ Objective: To explore the correlation between the expressions of TRAIL and Survivin proteins and the pathologic features of laryngeal epithelial lesions. Methods: Immunohistochemistry was used to determine the expressions of TRAIL and Survivin proteins in normal mucosa and displasia and invasive carcinoma tissues of 48 cases of laryngeal carcinoma. Results: The expression of Survivin protein progressively increased, whereas that of TRAIL protein gradually decreased in a route of normal mucosa and displasia and invasive carcinoma tissues. The expression of TRAIL protein in laryngeal invasive carcinoma was negatively correlated with that of Survivin protein (r=-0.510, P<0.01). Conclusions: The expressions of TRAIL and Survivin proteins are significantly related to the genesis and progression of laryngeal carcinoma.

［KEY WORDS］ Laryngeal neoplasms; Pathology; Immunohistochemistry; Tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand; Survivin 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand, TRAIL)属于肿瘤坏死因子家族，可激活肿瘤细胞的凋亡［1］； Survivin基因是凋亡抑制基因的新成员，与肿瘤的发生发展及预后密切相关［2］。本研究通过免疫组化的方法检测两种蛋白在喉癌、不典型增生及正常组织中的表达，以探讨其阳性表达与喉癌发生发展的关系。

1 资料与方法

1.1 材料选择我院2000 2005年收集的喉癌手术标本48例，每例均在喉正常黏膜、癌旁及癌组织处分别取材，常规脱水，石蜡包埋。第一抗体TRAIL和Survivin多克隆抗体为Sigma公司产品，SP免疫组化试剂盒购自北京中山公司。第一抗体工作液浓度TRAIL为1:100,Survivin为1:200， PBS替代第一抗体作阴性对照。

1.2 检测方法常规脱蜡，3%过氧化氢液去除内源性过氧化物酶，正常羊血清封闭，分别加TRAIL和Surviv工作液，4?℃过夜，生物素标记二抗孵育，室温静置30?min,滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温静置30?min, DAB显色，苏木素复染，中性树胶封片。

1.3 结果判定阳性显色为棕黄色，TRAIL和Survivin蛋白表达以胞浆着色为主，偶见胞核表达。计数5个高倍视野中阳性细胞的百分比，阳性细胞>10%的计为阳性。

1.4 统计学处理两样本率的比较采用四格表资料的χ2检验及相关分析。

2 结果

2．1 组织分型及分级本组48例均为浸润性鳞状细胞癌，癌旁黏膜不典型增生40例，正常黏膜组织48例。浸润癌组织学分级: Ⅰ级16例，Ⅱ级20例，Ⅲ级12例；有淋巴结转移20例，无淋巴结转移28例。

2.2 不同病变喉组织中TRAIL, Survivin蛋白的表达及其与浸润癌临床病理特征的关系不同病变喉组织中TRAIL阳性表达水平按正常黏膜-不典型增生-浸润癌顺序逐渐降低（图1 3）；而Survivin蛋白表达逐渐升高（图4 6）。TRAIL的阳性表达水平与喉鳞状细胞癌组织的分级呈负相关。Ⅰ、Ⅱ级鳞状细胞癌呈高表达，而在Ⅲ级鳞状细胞癌呈低表达或不表达，分级越高，TRAIL阳性表达率越低，即分化程度愈差，TRAIL表达愈低；本次实验发现Survivin蛋白表达与分级无关，不同分化程度的浸润癌中，Survivin蛋白表达无明显变化，见表1。

图 5 Survivin在不典型增生中表达阳性(SP法，×400)

2.3 喉浸润癌组织中TRAIL蛋白的低表达与Survivin蛋白的高表达呈负相关见表2。表1 TRAIL，Survivin蛋白的表达与喉癌临床病理特征的关系表2 TRAIL和Survivin在喉癌组织中的表达关系

3 讨论

1995年Wiley等从人心肌的cDNA文库中克隆出的TRAIL属TNF超家族成员，人TRAIL基因定位于3号染色体长臂2区6带(3q26),编码281个氨基酸，其蛋白的分子质量是3.22×104?u，是二型跨膜蛋白质。TRAIL有两类受体(死亡受体DR和“诱骗”受体Deft), TRAIL与靶细胞膜上的特异性死亡受体结合，通过其下游的受体结合分子向细胞内传递死亡信号，最后通过Caspase引发细胞凋亡［3］。

本组研究从喉正常黏膜、不典型增生到鳞状细胞癌组织中TRAIL的表达逐渐减少，提示喉癌发生过程中TRAIL丢失，可能由此造成TRAIL与TRAIL受体结合诱导的凋亡减少，从而促进了喉癌的发生发展，提示TRAIL与喉癌的发生发展有关。这为喉癌的治疗提供了新的方向和理论依据。

临床及病理上不典型增生为癌前病变，本结果显示，TRAIL及Survivin在不典型增生与浸润癌中表达差异无统计学意义(P>0.05)，从凋亡调节因子方面支持了不典型增生为癌前病变的观点。TRAIL在不同级别癌组织中的表达有差异。在高分化癌组织中，以癌巢的中心部位表达最强，而在增生旺盛的周边部位表达弱，在低分化的癌组织中表达较弱，弥漫分布。细胞分化程度愈差，TRAIL表达愈弱，表明TRAIL的分布与细胞的分化有关。TRAIL低表达可能是分化差的标志。细胞凋亡过程受凋亡促进因子(p53, Fas等)和凋亡抑制因子(Bcl2, Survivin等)的共同调节。Survivin可直接作用于Caspase，主要抑制Caspase3和Caspase9活性，阻断细胞的凋亡过程［4］。应用敏感的RTPCR技术发现，Survivin在癌组织中的表达是一个渐进的过程，随着正常细胞向癌细胞的恶性转化，Survivin的表达逐渐升高［5］。本实验结果显示，从正常黏膜-不典型增生-浸润癌，Survivin蛋白表达的阳性率依次升高，因此认为Survivin的表达可能涉及到细胞生物学转化的中间环节，正常及增生黏膜上皮Survivin阳性表达提示形态学尚正常的组织存在癌变的可能，因而具有早期诊断的价值。

TRAIL具有诱导细胞凋亡的作用，而Survivin是凋亡抑制因子，二者的表达失调可能是细胞癌变的原因［6］。本研究表明，在喉癌及其癌前病变中，TRAIL的表达与Survivin的表达提示二者在体内相互抑制，在喉癌的发生发展过程中可能起着一定的作用。但是肿瘤的发生是多基因共同作用的结果，TRAIL, Survivin与其他癌基因、抑癌基因、凋亡相关基因的关系，还有待进一步研究。

【参考文献】
［1］〖ZK(#]Grifith TS, Lynch DH. Trail: a molecule with multiple receptors and control mechanisma［J］.Curr Opin Immunol, 1998, 10(4):559563.

［2］王孝养，张珍祥.Survivin与肿瘤细胞凋亡［J］.中华病理学杂志，2002,31(1):6870.

［3］ Wiley SR, Schooley K, Smolak PJ, et al. Identification and characterization of a new member of the TNF family that induces apoptosis［J］. Immunity, 1995, 3(6):673682.

［4］ Conway EM, Pollefeyt S, Steiner MM, et al. Deficiency of Survivin in transgenicmice exacerbates Fasinduced apoptosis via mitochondrial pathways［J］. Gastroenterology, 2002, 123(2):619631.

［5］贾克东.Survivin基因及其在肿瘤研究中的意义［J］.国外医学肿瘤学分册，2002, 29(5):338340.

［6］杨柳芹，房殿春.胃癌细胞NFκB和Survivin的表达对TRAIL抗瘤作用的影响［J］.第三军医大学学报，2004, 26(7):584586.