【摘要】 
目的：探讨参芪扶正注射液对肝癌小鼠5-FU化疗后免疫功能的影响。方法：建立H22肝癌荷瘤鼠模型后，采用5-FU 25 mg/kg连续5 d腹腔注射建立肝癌小鼠化疗后动物模型，然后随机分为对照组和治疗组,治疗组给予参芪扶正注射液40 mL/(kg·d)、80 mL/(kg·d)分别腹腔注射给药,连续7 d；同时对照组予生理盐水40 mL/(kg·d)。末次给药后24 h采用免疫器官重量法检测胸腺指数/脾脏指数；同时采用放射免疫法测定小鼠血清中IL-2和TNF-α的含量。结果：治疗组小鼠胸腺指数、脾脏指数均高于对照组(P<0.05)；治疗组小鼠血清IL-2水平显著高于对照组,而治疗组TNF-α低于对照组(P<0.05)。结论：参芪扶正注射液可提高肝癌小鼠5-FU化疗后的免疫功能,临床上可试用参芪扶正注射液对肝癌化疗后免疫功能低下患者进行治疗。

【关键词】  参芪扶正注射液 肝肿瘤 化疗小鼠 免疫功能

    Abstract  Objective:To investigate the effect of Shenqi Fuzheng Injection  on immune function  of liver cancer mice after chemotherapy. Methods：Hepatoma 22 bearing mice models were established.The liver cancer mice chemotherapy model was established by abdominal cavity injection of 5-Fu with a dose of 25mg/（kg·d) for five days. Then the mice were  divided randomly into three groups, including control group and therapy (low and high dose) groups.  Mice in therapy groups were given Shenqi Fuzheng Injection 40 mL/（kg·d) and 80 mL/（kg·d) respectively for 7 days. The control group were given saline 40 mL/（kg·d) for 7 days. After 24 h of the last treatment, the immune organ index was evaluated.The levels of IL-2 and TNF-a  in mouse serum were measured By RIA.Results：There  were significant differences in the thymus index and spleen index between the treated groups and control group. It also significant increascd the level of IL-2 and decreased the level of TNF-a  in the serum of the liver cancer mice after chemotherapy.Conclution:Shenqi Fuzheng Injection can  improve  immune function  in  immunosuppressed mice after chemotherapy and be used clinically for the treatment of immunocompromised patients after chemotherapy.

    Key words  Shenqi Fuzheng Injection;Liver cancer;Chemotherapy mice;Immune function

    化疗是肝癌综合治疗的主要手段之一，但化疗药物在杀死肿瘤细胞的同时也对正常组织、细胞有一定程度的破坏作用。因此，如何降低化疗药物所致的细胞毒性和免疫功能低下是肝癌临床治疗面临的一大难题。参芪注射液是根据中医辨证论治的精湛理论而配方研制，以党参、黄芪为主药,而党参、黄芪为我国传统的扶正中药,可益气固本。本研究将参芪扶正注射液用于化疗后肝癌小鼠,以华内胸腺指数、脾脏指数、血清中IL-2和TNF-α水平变化为观察指标，探讨其对肝癌小鼠化疗后免疫功能的影响,为临床辅助肝癌治疗提供实验依据。

    1  资料与方法

    1.1  药品与试剂

    5-FU由山西普德药业有限公司惠赠，参芪扶正注射液由丽珠集团惠赠，IL-2和TNF-α放免试剂盒购自北京东亚放射免疫研究所,其他试剂均为分析纯试剂。

    1.2  动物

    清洁级昆明小鼠36只，雌雄各半,6周龄～8周龄,SPF级，体重18 g～20 g，购自山西医科大学动物实验中心，许可证号(晋)2007-0002。

    1.3  肿瘤细胞株

    小鼠肝癌腹水株H22由山西医科大学药理教研室提供。

    1.4  动物模型的建立及分组处理

    无菌条件下抽取9 d生长良好的腹水为瘤源,按1∶3比例用生理盐水稀释,充分混匀, 在显微镜下计数,用生理盐水调整细胞浓度为1.5×104/L，取0.2 mL于每鼠右侧腋窝下皮下接种。小鼠接种24 h后用5-FU 25 mg/（kg·d) 连续腹腔注射5 d，建立肝癌化疗后小鼠动物模型。然后将上述小鼠随机分为模型对照组、参芪高剂量组和参芪低剂量组,每组10只。5-FU末次给药后24 h分别给予参芪扶正注射液40 mL/（kg·d)(参芪低剂量组)、80 mL/(kg·d) (参芪高剂量组),生理盐水40 mL/(kg·d) (模型对照组)腹腔注射，连续7 d。末次给药后24 h分别检测各组小鼠免疫指标。

    1.5  免疫指标检测

    1.5.1  小鼠胸腺指数、脾脏指数的测定：末次给药后24 h处死小鼠，仔细解剖各组小鼠的胸腺和脾脏并用电子天平称取其重量,分别检测各组小鼠脾脏指数和胸腺指数。脾脏(胸腺)指数=脾脏(胸腺)重量(mg)/小鼠体重(g)。

 1.5.2  小鼠血清IL-2、TNF-α含量的测定：末次给药后24 h将各组小鼠摘眼球取血0.5 mL～1.0 mL，置于一次性离心管内，3 000 r/min离心5 min,取血清置于-20 ℃保存。采用放免分析法测定，操作步骤按照放射免疫分析盒说明进行。

    1.6  统计学分析

    各组数据以(x±s)表示，用SPSS13.1软件进行统计分析。全部数据经方差齐性分析后，采用单因素方差分析。

    2  结果

    2.1.  参芪扶正注射液对肝癌小鼠化疗后脾脏指数与胸腺指数的影响

    参芪扶正注射液高浓度组可显著提高小鼠的胸腺指数、脾脏指数，与对照组相比有统计学意义，见表1。郑王巧等.参芪扶正注射液对肝癌小鼠5-FU化疗后免疫功能的影响表1  参芪扶正注射液对肝癌小鼠化疗后脾脏指数与胸腺指数的影响 与对照组比较，*P<0.01。

    2.2  参芪扶正注射液对肝癌小鼠化疗后血清IL-2及TNF-α含量的影响

    参芪扶正注射液治疗后小鼠血清中IL-2含量显著高于对照组，而TNF-α含量显著低于对照组，差异有统计学意义，见表2。表2  参芪扶正注射液对肝癌小鼠化疗后血清IL-2及TNF-α产生的影响 与对照组比较,*P<0.01

    3  讨论

    参芪扶正注射液采用我国传统补气药物党参、黄芪为主要原料精制而成，意在补气扶正。党参健脾益气，补中气以资生化之源；黄芪为补气药之长，补气作用全面，既可以内补脏腑之气，又能益卫固表，参芪并用应具有较好的扶正功效及免疫调节作用［１］。胸腺是T淋巴细胞分化和成熟的场所，脾脏是免疫细胞定居和发生免疫应答的场所。胸腺指数和脾脏指数的大小直接反映机体免疫水平的高低［2］。模型对照组小鼠化疗后的胸腺指数和脾脏指数明显偏低,表明肝癌小鼠化疗后免疫器官受损，免疫功能受到抑制，尤其是细胞免疫严重抑制。而参芪扶正注射液低剂量治疗组和高剂量治疗组小鼠的胸腺指数、脾脏指数均较模型对照组小鼠明显提高,表明参芪扶正注射液能够促进胸腺和脾脏细胞增殖分化。与文献报道一致［3］。

    IL-2主要由活化的CD4＋和CD8＋淋巴细胞产生,是调节机体免疫功能主要淋巴因子之一。它通过调节机体的免疫系统发挥抗肿瘤效应。IL-2能激活多种免疫细胞,诱导淋巴的增生与免疫效应,促进B细胞的免疫应答以及NK细胞、单核巨噬细胞的增生［3，4］。有研究表明，参芪扶正注射液能促进T细胞表达IL-2受体，升高活化T淋巴细胞数，增强ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力，从而提高化疗后免疫功能低下小鼠的细胞免疫功能。治疗可以提高小鼠血清中IL-2含量［5］。本研究表明，参芪扶正注射液可以提高小鼠血清中IL-2含量，从而增强小鼠的免疫功能。

    TNF-α的作用与其含量密切相关,适量的TNF-α对机体具有保护作用,但过量的TNF-α则对机体产生损伤反应［6］。许多临床报道肿瘤患者的TNF-α含量显著升高，从而导致机体细胞因子调节系统紊乱等反应，降低机体的抵抗力［７］。本研究结果显示，参芪扶正注射液能降低肝癌小鼠化疗后血清中TNF-α的含量，对抗机体化疗后免疫功能的损害。

    综上所述，参芪扶正注射液能提高机体细胞免疫功能，使化疗所致的细胞免疫水平下降及细胞免疫功能损伤得到较快恢复。因此，临床上可使用参芪扶正注射液对肝癌化疗后免疫功能低下患者进行治疗。