1.4方法 
1.4.1造模、分组与给药 SD大白鼠120只，随机分为6组：正常组，模型组，安妥明组，通络生骨胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组。除正常组外，各组均每周1次注射醋酸强的松龙（24.5 mg/kg）造模，在造模同时，各给药组均按表1剂量灌胃给药，模型组和正常组给予等量生理盐水。 
 
1.4.2检测指标 于实验后第4周、第8周、第12周分3批处死动物。进行股骨头大体观察（包括骨头外形，关节软骨色泽、外形）和组织学观察。病理组织制片：将股骨头沿冠状面劈开，用10％的福尔马林固定，5％ 的硝酸溶液脱钙，石蜡包埋，切片后一份作HE染色，一份做V.G染色，一份作Masson三色染色。墨汁灌注透明标本制备：将动物用戊巴比妥钠麻醉后，取腹部正中切口，显露腹主动脉和下腔静脉，分别插上导管，经腹主动脉持续恒压注入37.2 ℃肝素生理盐水，直到下腔静脉导管流出清澈溶液，再灌入2.5％ 戊二醛溶液，最后注入墨汁至老鼠双足趾甲下颜色转黑。取出股骨头放于4 ℃的冰箱中24 h，用10％ 甲醛固定，盐酸混合液脱钙，酒精逐级脱水，制成30 μm冠状面连续切片，再经二甲苯透明后封片。 
 1.5统计处理 实验数据用“χ(-)±s”表示，结果采用SPSS10.0统计软件包处理，统计方法为方差分析、q检验。
 
2 结果 
2.1大体观察 在实验动物中，无一例股骨头出现塌陷，模型组股骨头关节软骨微黄，少光泽，甚至软骨下有暗红瘀斑，但无塌陷，12周标本较第4周易切凿。 
2.2镜下观察 （1）正常组：骨小梁整齐清晰，排列规则，致密饱满；骨细胞清晰可见，偶见骨陷窝空虚；软骨下血管较丰富，结构清晰；髓腔内生血细胞丰富；骨小梁周沿成骨细胞数量多；墨汁灌注标本显示毛细血管丰富，交织成网状，边缘清晰。 
（2）模型组：骨小梁稀疏，变细，甚至断裂，结构紊乱，有碎片；骨细胞坏死，空骨陷窝明显增多；软骨下血管数量明显减少，管壁结构破坏，弹性纤维断裂。髓腔内脂肪细胞体积增大，有的融合成泡状，生血细胞数量减少；骨小梁周沿成骨细胞数量很少，髓腔内多核破骨细胞数量增多；墨汁灌注标本显示毛细血管稀疏，边缘不清，血窦欠丰富，数量少；上述病理表现随着时间的推移逐渐加重。 
 （3）安妥明组：骨小梁细长，偶有断裂；空骨陷窝较少，但仍可见；骨髓内生血细胞无明显空泡变性；成骨细胞数量及破骨细胞数量较少，骨小梁周沿无明显新骨沉积生长；软骨下血管数量欠丰富，软骨下髓腔内亦可见陈旧出血迹象；墨汁灌注标本毛细血管数量较少，血窦欠丰富，数量少，无明显墨汁弥散。 
 
（4）通络生骨胶囊组：①高剂量组骨小梁排列整齐，规则，致密饱满，无碎裂；中剂量排列尚整齐规则，但稍欠饱满；低剂量可见部分稀疏瘦长征象。 
 
②高剂量组骨小梁上骨细胞核清晰可见，位于中央，少见空骨陷窝存在，与正常组比较无显著性差异（P>0.05）；中、低剂量组可见部分空骨陷窝，但明显少于模型组（P<0.01）。③ 软骨细胞排列整齐，软骨下血管丰富，Masson三色与V.G染色示小血管壁清晰正常。④髓腔内造血细胞丰富，无明显大的脂肪滴；⑤骨小梁周沿梭形成骨细胞数量增多，排列致密，Masson三色提示骨小梁周沿有一层具有活性的新生骨存在；⑥墨汁透明标本显示毛细血管致密，边沿清晰，血窦丰富，数量多，周沿无明显墨汁弥散；各时间点病理表现无明显差别。结果见表1～3。

3 讨论 
Pietrogrand和Mastomarine于1957年首先报告了短期大剂量使用激素可引导起股骨头坏死，其主要表现为出现明显的空骨陷窝，骨小梁稀疏、碎裂，甚至出现了整块死骨，髓腔生血细胞广泛脂肪空泡化，血管密度、结构均有显著破坏。目前认为激素导致凝溶紊乱、血液流变性改变，高血脂血症与微血栓的形成，NO合成减少与血栓的形成，最后使股骨头血供异常，因营养供给不足、不能及时将代谢产物清除而致股骨头细胞坏死，但发病机理仍未能完全阐明。本实验模型组出现以上显著表现，提示单纯激素足已导致骨坏死。 
  
安妥明又名氯苯丁脂，是一种降血脂药物，早在1978年Wang应用脂质清除剂安妥明治疗兔激素性股骨头缺血性坏死，认为能抑制骨髓脂肪细胞病理性肥大，改善股骨头血运。周谋望等认为是安妥明改善了激素所致的脂质代谢紊乱，从而保护股骨头骨细胞免受激素损伤。本实验也表明安妥明对于髓腔生血细胞的脂肪化是有一定效果的，可抑制空骨陷窝率降低，但不能提高血管的数量、周径、血管密度与直径，说明其对血管无保护作用。 
  
通络生骨胶囊3个剂量组可提高空骨陷窝率、骨小梁面积、血管密度、软骨下小血管的数量与直径、成骨细胞计数等，说明通络生骨胶囊具有预防激素性股骨头坏死的作用。Satio认为反复的髓腔内出血与股骨头缺血性坏死的发病机理密切相关，小动脉的血管壁结构损害和血管组织破裂的痕迹被认为是股骨头坏死的特征表现，并且和髓腔内出血及骨小梁、骨髓坏死密切相关。本组实验中模型组软骨下的小动脉出现了内膜增生、中膜变性、平滑肌细胞坏死，肌纤维断裂以及反复的髓腔内出血，墨汁灌注标本出现区域性的墨汁缺乏现象，说明激素在导致股骨头缺血性坏死过程中，血管的损害（包括破裂和栓塞）是一个相当重要的环节，而通络生骨胶囊各剂量组动物这种现象得到了大大抑制与改善。我们的前期研究曾发现通络生骨胶囊能显著提高大鼠肠系膜微循环的血液流速、流速微积分和流态微积分；还能降低大鼠急性血瘀模型的全血比粘度、血浆比粘度和血沉；结合本试验结果，推测可能是由于通络生骨胶囊具有明显的活血化瘀作用，能显著促进血管生长，使坏死组织再血管化，保护和改善了血管结构，保证了组织的有效灌注，使骨细胞得以进行正常的代谢而预防了坏死。 
  
大量激素导致股骨头内的骨细胞坏死，同时也抑制了成骨细胞的活性。实验结果表明，通络生骨胶囊组的成骨细胞数显著高于模型组，Masson三色染色切片中，坏死的骨小梁周围出现了充满活性的新生骨，这说明通络生骨胶囊能够激发成骨细胞的活性，调节骨的代谢，促进新骨生长，使成骨细胞数量增多，从而促进新生骨的形成，维持了骨组织的力学框架，这可能是通络生骨胶囊治疗激素性股骨头坏死另一个原因。 
  
综上所述，通络生骨胶囊对激素性股骨头缺血性坏死有明显的预防作用，其作用途径可能是：（1）保护和改善微循环，保证了骨组织的有效灌注，使由于脂质代谢紊乱带来的有毒物质及时得到转输与排泄，给骨细胞生长提供一个良好的内外环境。（2）增强骨细胞的活力，预防了骨细胞内脂肪的异常堆积，激发成骨细胞活性、调节骨的代谢、促进骨的生长，保持了骨小梁的完整结构。