1材料和方法

 

1.1材料

    驱虫斑鸠菊注射液：每毫升相当于驱虫斑鸠菊注射液酮3mg（约相当于原生药290mg，具有燥湿祛风，舒筋通络，活血化瘀的作用：DMEM．DL-多巴；酪氨酸酶；噻唑兰（MTT）；曲拉通X-100（SIG-MA产品）；二甲基亚砜（DMSO ）；人A375黑素瘤细胞（由北京师范大学细胞生物学系提供）。

    TGL  16g 台式商速离心机（上海医用分析仪器厂），960酶联免疫侧定仪（德国）。

略

 

2结果

 

2.1驱虫斑鸿菊对A375人黑素瘤细胞形态影响

    图1是药物作用48 h后A375人黑素瘤细胞形态变化。图中可见，与对照组相比，驱虫斑鸠菊有效成分黄酮的浓度下细胞形态生长正常，密度增加，树突增多并延长，但当药物浓度继续增高时，细胞内颗粒增多，失去光泽，甚至死亡，显示出明显的细胞毒性。

 

2.2驱虫斑鸿菊对A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响

    表1为驱虫斑鸿菊体外对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响。首先驱虫斑鸿菊在作用24 h小时后酪氨酸酶活性未见明显增加，作用48 h后酪氨酸酶活性明显增加。其次，当驱虫斑鸿菊浓度在3x1 0-'-3x 10-4叱甸范围时，随浓度增加酪氨酸酶活性逐渐增强，浓度再增加，则酪氨酸酶活性反而下降。其可能的原因是商浓度的驱虫斑鸿菊在体外可能对A375黑素瘤细胞有毒性作用，从而抑制了酪氨酸酶的分泌。

 

2.3驱虫斑鸿菊对A375黑素瘤细胞代谢活性的影响

    用MIT比色法测定不同浓度驱虫斑鸿菊体外对培养72 h的A375细胞增殖的影响，从表2可见，驱虫斑鸠菊的浓度在一定范围内可使A375黑素瘤细胞代谢加快，表现为随药物浓度增加，570 nm光密度吸收值增加。当超过该浓度范围时对细胞生长产生毒性作用形态上可见大部分细胞死亡，570nm光密度吸收住下降。

 

2.4驱虫斑鸠菊对A375黑素瘤细胞黑素含里的影响

    驱虫斑鸿菊对A375黑素瘤细胞作用4d后测定黑素含量，结果见表3。在所侧定驱虫斑鸠菊的浓度范围内，随药物浓度增高，黑素含量不断增加，与驱虫斑鸿菊对A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性、细胞增殖活性的影响稍有不同，对黑素含含量的影响未出现高浓度的抑制现象。

 

3讨论

    以前的研究发现驱虫斑鸠菊可在体外激活酪氨酸酶活性，此结果显示，驱虫斑鸠菊可能在诱导黑素合成过程中发挥作用。为了进一步研究驱虫斑鸠菊诱导黑素合成的机制，本研究用人A375黑素瘤细胞作为模型，研究该药在体外培养的细胞水平对细胞生长、酪氨酸酶活性及合成黑素的影响。结果显示，药物作用24 h后，未见驱虫斑鸿菊对细胞酪氨酸酶活性有影响，在48 h到72 h后测定时，可见酪氨酸醉活性明显升高，而且随着剂量增加，酪氨酸酶活性有所增加，但当浓度达到一定时，则出现细胞毒性作用，表现为细胞变形死亡。说明驱虫斑鸠菊不仅在体外直接激活酪氨酸酶活性，对体外培养的细胞也具有促酪氨酸酶活性合成作用。这一结果与其对细胞生长活性影响十分相似；对分泌黑素功能也随药物剂增加，出现明显促进作用。

 

 

参考文献

I11邓军，叶庆偷，刁庆春等．芳香维甲酸乙脂对紫外线诱导的人黑素细胞合成的影响．中华皮肤科杂志，1997，20（6）：389等