恩博克®乳膏
（抗人白细胞介素-8单克隆抗体乳膏）
研究资料汇编
前 言
银屑病（psoriasis）是在特定遗传背景下，通过多种因素而诱导而发生的慢性炎症性皮肤病。在不同地区和人群中银屑病的发病率有很大差异。白种人群的发病率超过2%，极端的接近5%。黄种人群的发病率较低，我国银屑病科研协作组在1984年的调查结果表明，银屑病的发病率为0.123%，其中寻常型银屑病占97.98%，脓疱型和关节型均为0.69%，红皮病型为0.58%，但多数皮肤病专家认为近几年银屑病的发病率有增加的趋势。
银屑病自Willan和Henra命名以来已有200多年的历史，由于其发病机理仍然不清楚，导致虽然用于治疗银屑病的药物众多，但治疗效果均不理想，且容易复发。
恩博克乳膏（抗人白细胞介素-8单克隆抗体乳膏）是根据近年来银屑病发病机理的最新研究结果，即银屑病的病患局部细胞因子水平异常使得出现皮肤银屑病的病理变化的机理，而研制的特异治疗银屑病的药物。恩博克乳膏（抗人白细胞介素-8单克隆抗体乳膏）可使银屑病病患局部细胞因子水平恢复正常，消除银屑病的病理变化，在细胞因子水平上达到有效治疗银屑病的目的。
药理作用
恩博克乳膏（抗人白细胞介素-8单克隆抗体乳膏）治疗银屑病的机理为，通过恩博克乳膏（抗人白细胞介素-8单克隆抗体乳膏）中的抗人白细胞介素-8单克隆抗体中和银屑病病变局部异常增高的白细胞介素-8的生物学活性，封闭异常增高的白细胞介素-8的病理生理功能，在细胞因子水平上达到有效治疗银屑病的目的。
在银屑病病变局部的皮肤中，白细胞介素-8的水平为正常皮肤的100余倍。白细胞介素-8是细胞因子中称之为化学趋向因子（或趋化因子）的一种蛋白分子，在趋化因子大家族中，按照它们分子结构中的半胱氨酸位置可分为C-X-C类趋化因子和C-C类趋化因子。白细胞介素-8属于C-X-C类趋化因子，它是由72个氨基酸组成的，分子量为8000左右。白细胞介素-8是嗜中性粒性白细胞的强烈趋化和激活因子，能强力地汇集并激活嗜中性粒性白细胞。白细胞介素-8在许多生理及病理过程中具有广泛的生物活性，它在炎症过程中起着关键性的作用。白细胞介素-8由多种参与炎症反应的细胞产生，如巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和内皮细胞、角质形成细胞等等。它继而作用于内皮细胞、中性粒细胞和T淋巴细胞，从而形成炎症反应。
白细胞介素-8与其在某些细胞表面的受体结合后，使靶细胞的功能发生一系列改变，引起一系列前炎症病理生理反应，包括细胞粘附受体CD11b/CD18 （Mac-1）在中性粒细胞中表达增加、增强淋巴细胞对人内皮细胞的粘附，增加中性粒细胞的趋化性及脱颗粒作用，并促进血管生长因子表达和分泌，形成血管增生等。IL-8因能引起中性粒细胞浸润并使其释放溶酶体和过氧化阴离子而导致或促进组织损伤。在人类炎症性疾病中，IL-8的表达和分泌明显增加，特别是病变组织局部浓度过升高，例如，银屑病、类风湿性关节炎、特发性肺纤维化、肠道炎症、成年人呼吸窘迫综合性、败血症休克等。
白细胞介素-8作为一种CXC类的化学趋化因子在银屑病的病理机理中，主要有以下关键作用：
1．白细胞介素-8在皮肤组织内过量表达和分泌，汇集大量嗜中性粒细胞、T淋巴细胞和其他炎症细胞，对皮肤组织的浸润，引起微脓肿和皮肤组织结构的损伤。嗜中性粒细胞、T淋巴细胞等也可以产生大量IL-8，而使局部病理改变加重，病变迁沿不易治愈。
2．白细胞介素-8激活表皮角质化细胞，引起角质化细胞的异常增殖和角化不全，大量细胞坏死和皮屑脱落。
3．白细胞介素-8激活的角质化细胞又在血管生成因子的异常表达过程起着重要作用。激活的角质化细胞具有正和负双向缺陷，既过度产生IL-8使得血管生成因子产生增加，又下调血管生成抑制因子表达，使银屑病灶区的血管生成处于失控状态。大量血管形成为表皮细胞过量增生提供足够血液，促进了炎症的快速形成。
4．白细胞介素-8的活性是通过它与其在嗜中性粒细胞或角质化细胞等炎症性细胞表面的受体相结合而介导的。银屑病病灶区的角质化细胞和浸润的嗜中性粒细胞，不仅本身能产生大量IL-8而且诱导IL-8受体在细胞表面的表达引起连续不断的恶化循环，造成持续不断越来越严重的皮肤炎症。
抗人白细胞介素-8单克隆抗体对银屑病的治疗作用：
恩博克乳膏中的抗人白细胞介素-8单克隆抗体是一种高效价特异性针对白细胞介素-8的中和性抗体，它能十分专一性地与白细胞介素-8结合，封闭白细胞介素-8的化学趋向活性等病理生理功能，从而阻断嗜中性粒细胞和T淋巴细胞等炎症细胞对皮肤组织的浸润，阻断血管生长因子和血管生成抑制因子在病变局部部位的过量表达和微血管生成，阻断表皮角质化细胞的激活和异常增生及坏死，达到有效治疗银屑病的效果。
治疗用抗人白细胞介素-8单克隆抗体是用基因重组人体单核细胞来源的白细胞介素-8（72个氨基酸组成，分子量为8.0kd）免疫SPF级Balb/c小鼠，经杂交瘤技术筛选而得到的具有高度亲和力并对I白细胞介素-8生物活性具有高度中和能力的单克隆抗体，其免疫球蛋白亚型鉴定为IgG1，Kappa型抗体。抗人白细胞介素-8单克隆抗体的生产过程中，严格控制质量，保证抗人白细胞介素-8单克隆抗体具有高度生物活性、高纯度和无外源污染因子混入，保证银屑病病患者在使用时安全有效。
毒性及不良反应研究
1. 抗白细胞介素-8单克隆抗体乳膏外用治疗银屑病六周后，病人体内HAMA反应（人抗鼠免疫球蛋白抗体）的检测：
鉴于恩博克乳膏中的抗人白细胞介素-8单克隆抗体是鼠源性单克隆抗体。大量临床治疗资料证明，注射鼠源性单克隆抗体后常常会引起机体产生抗鼠免疫球蛋白的反应（即HAMA）。因此，外用单克隆抗体的途径是否也存在HAMA反应是必须加以阐明的，这不仅关系到抗体的疗效，也关系到可能产生的不良副作用。
我们在II/III期临床试验时，对46例银屑病病人在治疗前和治疗6周后的血清进行了HAMA检测，其检测方法和结果如下：
（1）HAMA试剂盒试剂（ELISA）。
（2）HAMA标准曲线制备：
用2mL蒸馏水充分溶解HAMA标准品使之浓度为400ng/mL，然后用标准品稀释液，将其作倍比（2 X）系列稀释至6.25ng/mL,即获7个不同浓度之标准,供EIA使用。此7个不同浓度为：400ng/mL，200ng/mL，100ng/mL，50ng/mL,25ng/mL，12.5ng/mL，6.25ng/mL。
（3）结果判断：
将标准品的浓度作为X轴，相应OD为Y轴，由此得到HAMA EIA标准曲线，将待测标本的OD在此标准曲线上查到相应的浓度，即为该标本HAMA EIA结果，凡结果低于50ng/mL为阴性结果。
46例受测血清中仅一例治疗前后均出现HAMA 20ng/mL—30ng/mL，但都在临界值以下，所以HAMA呈阴性反应。其余45例血清均未检测出HAMA反应。
按照美国NIH报告，注射鼠源性单克隆抗体治疗疾病，最早可在第8天就出现HAMA阳性反应（HAMA＞62.5ng/mL为阳性反应），一般可在治疗后10—14天出现HAMA阳性反应。当病人体内出现抗鼠免疫球蛋白的抗体后，单克隆抗体的治疗效果就会受到影响。而本实验显示，单克隆抗体外用治疗不出现HAMA反应，所以，可以长期安全使用。
乳膏中单克隆抗体是持续微量、缓慢地透入表皮皮损组织，与皮损组织中的白细胞介素-8直接结合，形成抗原-抗体复合物，并可能在皮肤局部被降介或消化。所以，未与白细胞介素-8结合的游离态单克隆抗体或抗原-抗体复合物进行血液中是极为微量的。微量抗体分子持续、缓慢地进入体内，可能诱导机体免疫系统的免疫“遗漏”或“耐受”，抑制了HAMA的产生。
皮肤刺激性：
在动物试验（家兔、豚鼠）和人体试验中，破损皮肤使用恩博克乳膏后，均无明显变化，提示恩博克乳膏对皮肤无刺激性作用和无致敏作用。
对同源性细胞因子功能的影响：
特异性鉴定结果证明，抗人白细胞介素-8单克隆抗体与其他细胞因子、化学趋向因子GM-CSF 、TGF-β 、MCAF、TNF-α、 IL-7、 IL-1β、 b-FGF、 IL-16、 MCP-3、 M-CSF、 EGF以及与IL-8结构上同源的细胞因子GROα、 PF-4、 ENA78、 NAP-2 、GCP2均无交叉反应，故抗人白细胞介素-8单克隆抗体不会干扰同源性细胞因子的功能。
II/III期临床试验表明，外用恩博克乳膏安全性高，患者耐受性好。不良反应有局部刺激、红斑等，多数呈轻度，不影响对银屑病的治疗。局部不良反应发生率为7.56%，与对照组（8.69%）比较，无统计学差异。无全身不良反应发生。
典型病例
例1 朱某，男性，48岁，2000年4月24日就诊。病史：全身皮肤发生红斑、脱屑，轻度痒感已1个半月。发病前半个月曾经感冒、发烧、咽部疼痛。近来因工作紧张病后未曾治疗。既往身体健康，从未患过类似疾病，家族中亦无类似疾病发病史。检查：躯干、四肢（伸侧为主）散在甲大、指头大红斑，轻度浸润，上覆银白色鳞屑。薄膜现象，点状出血现象阳性。诊断：寻常性银屑病，进展期。皮损面积约占体表面积10%左右。病情评分为9分。予以白细胞介素—8单抗乳膏（揭盲得知）每日二次，外搽治疗。用药1周后已不痒，鳞屑明显减少，2周后显著好转，用药3周红斑、鳞屑性皮疹消失，残留明显的色素沉着，用药4周即停止用药。至第6周色素沉着亦减轻，痊愈（照片NO.54）。疗程中无不良反应发生，治疗前后进行了血、尿常规、肝肾功能及心电图检查，均无异常出现。
例2 李某，男，59岁，病史：全身皮肤发生脱屑性红斑已20年。病程中有时轻有时重，但与季节无明显关系。5年前曾接受氨甲喋呤片剂口服治疗，约1个月后皮疹消退，此后未再复发。直至4个月前自己认为吃海虾后复发，此后皮疹逐渐增多、扩大，有明显的痒感，既往身体健康，除皮肤病外，未患过其它明显疾病，本病亦无家族发病史。检查：头皮、上肢、臀部散在与密集指头大、钱币大及掌心大小的红色斑块，上覆银白色鳞屑、薄膜现象及点状出血现象阳性。诊断：寻常性银屑病，进展期，皮损面积约占体表面积10%左右，病情评分为15分，予以随机号G4的乳膏，每日二次，外搽治疗。用药1周后痒感和鳞屑明显减轻，4周后已显著改善，至第6周皮疹基本消退，达到基本痊愈（照片N0.5）。疗程中无不良反应发生。治疗前后检查血、尿常规、肝肾功能和心电图，均无异常。揭盲得知为治疗药。
例3 蔡某，男，51岁，2000年4月5日就诊。病史：颈部、上肢鳞屑性红斑，伴瘙痒2月，2000年2月初，因劳累后，颈部、双上肢出现散在鳞屑性红斑，伴瘙痒，每天需搔抓4-6次，此次就诊前未治疗过。既往体健，家族中无类似病人。检查；颈部、双上肢散在黄豆或甲盖大小红色斑块，表面覆盖较多银白色鳞屑，轻刮则脱落，再刮有点状出血。诊断：寻常型银屑病（小斑块状），进行期，皮损面积约占体表面积10%，病情评分为12分。予以抗人白细胞介素—8乳膏治疗（揭盲得知），每日外用2次。6周后，症状、体征全部消失，临床治愈。治疗过程中未见不良反应，治疗前后血、尿常规，肝肾功能、心电图无异常。
例4 叶某，女，46岁，2000后3月31日就诊。病史：躯干、四肢反复起鳞屑性红斑。伴瘙痒8年余。劳累后易复发，用过多种中西药治疗，效果不佳。2月前，因发生婚变，皮疹复发，伴剧痒，遂来本院就诊。既往体健，家族中无类似病人。查体：躯干、四肢散在鳞屑性红斑、丘疹，Auspitz征阳性。诊断：寻常型银屑病，进行期，皮损面积约占体表面积20%，病情评分为14分。予以抗人白细胞介素—8乳膏治疗（揭盲得知），每日外用2次，轻揉数分钟。1周后，瘙痒减轻，脱屑减少。4周后病情明显减轻，疾病评分为5分；6周后，皮疹消退，仅见色素斑或淡红斑，症状消失，疾病评分降为3分。治疗过程中未见不良反应，治疗前后血、尿常规，肝肾功能、心电图无异常。