舌癌(carcinoma of tongue)是口腔颌面部最常见的恶性肿瘤，其生物学特性非常复杂，肿瘤发展快，术后复发率高，愈后较差。提高舌癌治疗疗效的关键在于预防和选择合理的综合治疗方案。近年来，一些新的方法及新模式相继引入舌癌临床治疗，确立了以外科手术为主的舌癌综合治疗概念。分子生物学的迅猛发展，使得肿瘤生物治疗成为继手术、放疗、化疗之后的第四种治疗模式。而分子靶向药物在多种实体瘤的临床应用，更充满了生机和活力。表皮生长因子受体酪氨酸激酶(epidermal growth factor receptor tyrosine kinase，EGFR-TK)抑制剂是新近出现的、对实体肿瘤确有疗效的靶向治疗药物。盐酸埃克替尼(克美纳)是一种靶向表皮生长因子受体的酪氨酸激酶抑制剂，有学者报道其在体外可抑制人表皮细胞癌(A431)、人胃腺癌细胞(BGC-823)的生长增殖。但它对舌癌的作用如何，还未见有关研究报道。本试验通过体外培养人舌鳞状细胞癌(’ronguesquamous cell carcinoma)Tca8113细胞，采用不同浓度的盐酸埃克替尼作用不同的时间，然后观察肿瘤细胞的生长状态、细胞周期分布、细胞凋亡情况和细胞蛋白，如：细胞周期调节蛋白cyclinD<,1>、P<,27>、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)、上皮性钙粘附蛋白(E-cadherin，E-cad)的表达变化。为进一步了解酪氨酸激酶抑制剂对肿瘤细胞的作用机制提供有意义的试验资料，为酪氨酸激酶抑制剂用于舌鳞状细胞癌的治疗提供依据。

目的 探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂盐酸埃克替尼对体外培养的人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞的抑制作用及其可能机制。

 材料与方法 1．人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞由上海交通大学口腔医学院惠赠。
2．盐酸埃克替尼(克美纳)由浙江贝达药业有限公司惠赠。
3．采用四甲基偶氮哗盐光吸收法(MTT法)检测盐酸埃克替尼在浓度为5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L时作用于人舌鳞癌Tca-8113细胞后12h、24h、48h、72h、96h的细胞增殖情况，计算各组细胞的增殖抑制率。倒置显微镜观察细胞生长状态及形态学改变。
4．采用流式细胞仪分析细胞周期变化、检测细胞凋亡率。
5．采用间接免疫荧光联合流式细胞技术及免疫细胞化学方法检测盐酸埃克替尼对人舌鳞癌Tca8113细胞cyclinD<,1>、P<,27>、MMP-9、E-cad蛋白表达的影响。
6．应用SPSS13.0统计学软件，计量资料以均数±标准差(X±s)表示，采用重复测量数据方差分析。检验水准α=0.05。

结果．盐酸埃克替尼对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用：同一时间点不同浓度盐酸埃克替尼(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)对人舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用，随浓度增加而增强(P<0.01)；同一浓度盐酸埃克替尼在不同时间点(12h、24h、48h、72h、96h)对人舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用，随时间增加而增强(P<0.01)。

总的来说；
1、盐酸埃克替尼对人舌鳞癌Tca8113细胞的生长抑制作用具有剂量和时间依赖性。
2．盐酸埃克替尼对人舌鳞癌Tca8113细胞细胞周期、细胞凋亡的影响表现在：随盐酸埃克替尼浓度、作用时间的增加，G<,0>/G<,1>期细胞比例逐渐增加，细胞凋亡率增加。统计显示其G<,0>/G<,1>期阻滞作用及细胞凋亡率均与浓度、作用时间成正相关。
3．盐酸埃克替尼作用于人舌鳞癌Tca8113细胞后cyclinD<,1>、MMP-9阴性表达；P<,27>、E-cad阳性表达。
 结论
1．盐酸埃克替尼能抑制人舌鳞癌Tca8113细胞的增殖，其抑制作用具有时间和浓度依赖性。
2．盐酸埃克替尼能改变人舌鳞癌Tca8113细胞的细胞周期分布，有明显的G<,0>/G<,1>期阻滞作用，并诱导细胞的凋亡。
3．盐酸埃克替尼能降低细胞周期蛋白cyclinD<,1>的表达，增加细胞周期调节蛋白P27的表达。
4．盐酸埃克替尼能降低MMP-9蛋白的表达，增加E-cad蛋白的表达，从而可能抑制肿瘤的浸润、转移。

Carcinoma of tongue is one of the most common malignant tumor of the oral and maxillofacial region. It has rather complicated biological characters, with fast progress, high postoperative recurrence and poor prognosis. The keys to improving curative effects for tongue carcinoma are prevention of recurrence as well as choice of treatment. The rapid development of molecular biology makes the bio-therapy to be the fourth kind of treatment mode following prior three kinds of methods, ie, surgery, radiotherapy a...