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消癌平-对抗人肝癌细胞的机制和甲胎蛋白(AFP)的作用

2010-07-30 13:50:39  作者:新特药房  来源:中国新特药网天津分站  浏览次数:101  文字大小:【】【】【
简介: 消癌平是乌骨藤的灭菌水溶剂。乌骨藤为番荔科植物白叶瓜馥木的根。据《中药大辞典》记载:乌骨藤性平,味温,人肝经。临床上用于晚期肝癌的动脉介人治疗取得较满意的疗效。为进一步了解其对抗人肝癌细胞的 ...
消癌平是乌骨藤的灭菌水溶剂。乌骨藤为番荔科植物白叶瓜馥木的根。据《中药大辞典》记载:乌骨藤性平,味温,人肝经。临床上用于晚期肝癌的动脉介人治疗取得较满意的疗效。为进一步了解其对抗人肝癌细胞的机制,本实验分别观察了它对体外培养的人肝癌Bel-7404和HepG2细胞生长的影响及其对甲胎蛋白(AFP)分泌的作用,兹报道如下。

一、消癌平对人肝瘤Bel7404细胞生长影响的实验研究

1.材料药物:消癌平,批号:970517。由中国人民解放军54800部队制药厂提供,每ml相当于原药材Ig。试剂及器材:MIT,RPM-1640,为Sigma产品。细胞株:人肝癌Bel-7404细胞,由中国科学院上海药物研究所细胞实验室传代培养。

2.方法采用MIT比色法,观察不同浓度(50,40,30,20,10mg/ml)消癌平对肝癌Bel-7404细胞生长的影响,同时设空白对照组和阳性对照组(HCPT)。取对数生长的细胞计数,用RPM-1640培养液配制细胞悬液,细胞数为2.0x10/ml,细胞液加人96孔板,置于37CCO,培养箱,药物作用7天,加MIT作用液,酶标仪测OD值,计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率。
抑制率=空白对照组OD540一用药组ODD/空白对照组OD540x100%。统计方法采用两组标本计量资料的t检验。

3.结果显示消癌平对体外培养的人肝癌Bel-7404细胞生长有直接抑制作用,药物作用7天后其IC50为21mg/ml,16mg/mI。详见表1、表2.
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二、消癌平对人肝瘤HepG2细胞生长及AFP分泌影响的实验研究

1.材料药物:消癌平,批号:970517。由中国人民解放军,4800部队制药厂提供,每ml相当于原药材1g。试剂及器材AFP放射免疫分析试剂盒,由同济大学放射免疫技术所生产,批号:981001;培养剂DMEM,购自Sigma公司;仪器,GC-1200Y放射免疫计数器。细胞株:人肝癌HepG2细胞,从美国引进,由中国科学院上海生物化学研究所汪源教授惠赠、上海药物研究所细胞实验室传代培养,具有强分泌AFP的生物学特性

2.方法细胞株置在无菌及含15%小牛血清的DMEM培养液中,2天更换1次培养液;当细胞长到茂密时,用0.25%胰酶消化传代。设空白对照组和消癌平组,观察不同浓度消癌平对HepG2细胞生长的影响。AFp含量测定采用放射免疫分析法。接种10Cels/ml细胞于24孔培养板中,设空白对照组和消癌平组(药物浓度为45mg/ml)。培养液每24小时更换1次,每天收集细胞上清液,测定细胞24小时的AFP分泌量,结果换算成ng/10细胞单位。统计采用两组标本计量资料的t检验方法。

3.结果应用不同浓度的消癌平作用于人肝癌HepG2细胞,发现当浓度为45mg/ml时,对肝癌细胞生长产生明显的抑制作用。在接种后的第6天,用药组细胞为对照组的1/3。详见表3
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消癌平在45mg/nml浓度时,对人肝癌HepG2细胞生长产生明显的抑制作用,但细胞形态的改变不明显,因此选择此浓度观察对肝癌细胞AFP分泌的影响。结果见表4、表5
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三、讨论本实验研究发现,消癌平对人肝癌Bel-7404细胞有明显的抑制作用,药物作用7天后,其IC50为21mg/ml16mg/m1;消癌平在45mg/ml浓度时,对人肝癌HepG2细胞产生明显的抑制作用,空白对照组细胞呈线性生长,用药组细胞生长受抑制,接种后第6天,用药组细胞为对照组细胞的1/3,同时消癌平能显著降低人肝癌HepG2细胞AFP的分泌。AFP是一种癌胚蛋白,临床上AFP的血浓度及动态曲线与肝癌病人的病情变化、肝癌细胞增殖及分化程度密切相关。AFP是肝癌细胞增殖的“自我需要”,临床上AFP升高者,肝癌的恶性程度往往较高,分化程度也较低。以上结果表明:消癌平在抑制肝癌细胞增殖的同时,能使AFP分泌量降低,可能使肝癌细胞向正常方向分化。

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