血小板减少症是临床上常遇到的疾病，常见于肿瘤放疗、化疗和骨髓移植患者，也见于特发性血小板减少性紫癜(ITP)、骨髓增生异常综合征(MDS)及慢性肝病等。尽管目前尚无较理想的治疗方法，但相应的药物研究仍然较为活跃，人促血小板生成素（TPO）及相关药物即为其一。
TPO是由335个氨基酸组成糖蛋白，分子量为30kD左右，它由N端(1～153氨基酸)结构域和C端(154～335氨基酸)结构域组成。N端结构域的氨基酸序列与人促红细胞生成素的氨基酸序列同源性较高,并有很高的保守性；C端结构域富含丝氨酸、苏氨酸和脯氨酸，并有6个潜在的N-糖基化位点，该段的氨基酸变异较大，保守性不强。
TPO促进血小板生成有两种方式，一是TPO分子与两个血小板及巨核细胞表面的配体（Mpl）受体结合，促使两个受体靠近形成二聚体，激活Janus 激酶2 使受体胞内区的酪氨酸磷酸化，激活胞膜内G 蛋白信号系统和转录本5(STAT5)等信号系统，G蛋白激活磷脂酶C，产生IP3、DG、Ca2+ 等第二信使分子，激活蛋白酶C，从而发生细胞学作用，刺激巨核细胞增殖、成熟及产生血小板。二是TPO与血小板结合后被血小板吞入，贮存于granules内，当血小板上的Mpl受体再次被其配体激活时，血小板内的TPO被释放进入血液，以促进血小板的生成。
下面就作用于TPO的治疗血小板减少症药物研究进展介绍如下：
一、第1代TPO相关分子
第一代TPO制剂包括重组人血小板生成素(rhTPO)、聚乙二醇化重组人巨核细胞生长衍生因子(PEG-rHuMGDF)和TPO/IL3融合蛋白。
rhTPO是一种完全糖基化的蛋白，由中国仓鼠卵巢细胞产生，具有与TPO相同的氨基酸序列和结构，即具有TPO受体结合位点和富含糖基的羧基末端位点。rhTPO半寿期为30-40h，静脉注射给药，注射后5 d血小板开始升高，10-14d达高峰。由于多种原因，美国在完成rhTPOⅡ/Ⅲ期临床试验后也驻足不前。目前全球仅在中国有rhTPO上市，为沈阳三生制药股份有限公司的重组人血小板生成素注射液。
PEG-rhMGD 由大肠埃希杆菌产生，为截断性非糖基化TPO片断(含TPO受体结合位点)，其氨基端耦联有一个相对分子质量为20000的聚乙二醇，相对分子质量约为60000。PEG-rHuMGDF半寿期为25-35h，皮下注射给药，同rhTPO一样，5d后血小板开始升高，10-14d达高峰。由于Ⅰ/Ⅱ期临床试验发现PEG-rhMGDF给药后可产生中和性抗体，能与内源性TPO起交叉反应并导致持久性血小板减少，1998年9月美国中止了PEG—rHu MGDF的临床试验。
TPO/IL3融合蛋白在动物实验显示可刺激巨核细胞生长，增加血小板数量。但由于其免疫原性的存在，未进行进一步临床试验。
二、第2代TPO相关分子
为了克服第1代TPO分子的缺陷，并且希望更加高效和可以口服给药，近几年发展了多种无免疫原性的第2代TPO分子。主要包括3类：TPO肽类模拟物、TPO非肽类模拟物和TPO激动剂抗体，以不同方式结合并激动TPO受体从而发挥生物学效应。
1．TPO 肽类模拟物
开发新的促血小板生成因子常用方法是经过蛋白肽文库筛选,筛查具有促进TPO依赖细胞系生长，与TPO缺乏同源序列的肽。美国Affymax研究所Cwirla等找到了1种14个氨基酸线性肽AF12505，其与TPO缺乏同源序列，但可与TPO受体结合，具有促进TPO依赖细胞系生长的生物学活性。AF12505化学两聚体的生物学活性与rhTPO相同。由于线性肽类在体内半寿期极短，插入人Fab段、IgG Fc段结构或聚乙二醇化则可大大延长其生物学效应。
（1）Fab59
Fab59是由Alexion抗体技术公司设计构建的一个TPO肽模拟物，其是由2个AF12505肽插入一个完整的人抗破伤风类毒素(TT)抗体Fab组成，其中一个肽插入重链的补体决定区域3,而另一个肽则插入轻链的补体决定区域2。选择该区域是由于其本身高度可变性,插入一个肽不会引起抗体产生。Fab59刺激TPO依赖的细胞生长活性与rhTPO相当，但注入小鼠体内效果比rhTPO低30倍。小鼠反复注射Fab 59后可产生鼠抗人Fab59抗体和抗TT—Fab抗体，但这些抗体与内源性鼠TPO或人TPO均无交叉反应。目前尚未见人体试验的报道。
 
（2）罗米司亭（AMG531、romiplostim、Nplate）
罗米司亭Amgen公司开发的是首个和迄今唯一治疗脾切除和脾未切除慢性免疫性血小板减少性紫癜（ITP）成人患者的血小板生成药，已于2008年8月获得美国FDA 批准上市。罗米司亭包含2个相同的单链亚单元,每个单链包含IgG Fc恒定区域和TPO模拟肽。Fc段能有效地延长药物半衰期，而TPO 模拟肽与羧基端通过共价键链接,包含2个TPO受体结合区域,具有血小板生成素活性，能和巨核细胞表面的TPO受体结合，活化细胞内通路，使血小板增加，而且与TPO没有序列同源性。
 
药动学:成年ITP患者单剂量皮下注射罗米司亭0.1～2μg/kg，显示血小板计数呈非线性的剂量依赖性。静脉注射1～3d或皮下注射4～9d后,血小板计数出现增加，在12～16d血小板计数达峰，28d后回到基线水平。此外,慢性ITP患者单剂量皮下注射罗米司亭1～10μg/kg，在2～3周内血小板计数峰值是基线血小板计数的1.3～14.9倍。在ITP患者长期扩大研究中,接受罗米司亭每周皮下注射,剂量在3～15μg/kg范围时,大约7～50 h后(中位数为14 h)出现血浆峰浓度，半衰期为3.5d。另一个临床ITP研究，使用罗米司亭(3μg/kg)治疗4例患者6周后，没有在血浆出现蓄积。
 
安全性评价:在短期（24周）使用罗米司亭最常见的不良反应是头痛、疲劳、鼻衄、关节痛、上呼吸道感染、头晕、失眠、肌痛、恶心,没有抗体对抗罗米司亭或者TPO。长期应用罗米司亭最常见的不良反应是头痛、鼻咽炎、疲劳和鼻衄。罗米司亭治疗相关的严重不良反应是骨髓网硬蛋白出现或者增加、严重出血、严重的鼻衄、血栓形成。尽管没有发现胶原纤维化或者慢性原发性骨髓纤维化进展，但在其他临床研究中,使用罗米司亭超过5μg/kg仍有个别患者出现骨髓网硬蛋白沉积于骨髓。此外，中断本品的治疗可能导致血小板减少的症状加重，可能增加患者出血危险。

其他适应症:罗米司亭治疗低风险的骨髓增生异常综合征，以及由化学治疗和丙型肝炎引起的血小板减少正在进行临床Ⅱ期研究。
罗米司亭相关专利:Amgen公司就罗米司亭申请的相关美国专利有US6835809和US7189827,等同中国专利CN1325447、CN1331701、CN1810832。
（3）PEG-TPOmp
聚乙二醇化是另一种增加TPO 肽类分子半寿期的方法，PEG-TPOmp就是其中的一个。动物试验表明，PEG-TPOmp能增加小鼠和狗的血小板产生。临床Ⅰ期试验表明，健康男性志愿者单次静脉注射PEG-TPOmp 0.375-3 g/kg，血小板数量出现剂量依赖性增高，10-12d达峰值，为基础值的1.4-3.2倍，令人感兴趣的是内源性TPO水平也呈剂量依赖性增高，提示Peg-TPOmp可能影响TPO的清除。目前未发现严重不良反应，血小板聚集功能显示正常。
2 TPO非肽类模拟物
开发新的促血小板生成因子的另一种方法是通过小分子文库筛选，筛查可以激活TPO 受体的非肽类分子，也称TPO非肽类模拟物。目前至少有6个不同的实验室在研究该类模拟物，该类模拟物具有3个特性：(1)具有种属特异性；(2)激活TPO受体的方式与rhTPO不同，不与rhTPO竞争结合TPO受体；(3)高度依赖于TPO。
 
（1）Eltrombopag
Eltrombopag（商品名为PROMACTA®）是葛兰素史克公司研发一种血小板生成素（TPO）受体激动剂，它作用于人TPO 受体的跨膜区域，启动信号传导通路，最终诱导骨髓祖细胞来源的巨核细胞增殖和分化，已于2008 年11月20日获美国FDA批准上市，用于治疗对糖皮质激素、免疫球蛋白或脾切除术反应欠佳的慢性特发性血小板减少性紫癜。
 
药动学：Eltrombopag 口服给药后，血药浓度在2～6 h 内达峰。血细胞中的药物浓度约为血浆药物浓度的50%～79%。体外实验表明，eltrombopag 与人血浆蛋白高度结合（＞99%）。Eltrombopag 经分解、氧化及与葡糖醛酸、谷胱甘肽或半胱氨酸结合而广泛代谢，主要排泄途径是粪便和尿液。健康受试者和ITP患者的血浆消除半衰期分别为21～32h和26～35h。男性的清除率比女性大27%。
 
适应证和用法：Eltrombopag 获美国FDA 批准的适应证为对糖皮质激素、免疫球蛋白或脾切除术反应欠佳的慢性ITP。应仅用于血小板减少程度和临床状况使出血危险增加的ITP 患者，不应用于纠正血小板计数。本品的推荐起始剂量为50 mg，每日1 次，东亚裔患者（如中国、日本或韩国）及肝功能中或重度损害患者，起始剂量为25 mg，每日1 次。每日最高剂量不得超过75 mg。Eltrombopag 应空腹服用（餐前1 h 或餐后2 h），与其他药物（如制酸剂）、富含钙的食物（如奶制品和钙强化果汁）或阳离子（如铁、钙、铝、镁、硒、锌等）补充剂间隔至少4h服用。
 
不良反应：eltrombopag 最常见的严重不良反应出血是。而且，绝大多数出血反应都发生于停药后。其他不良反应还包括恶心、呕吐、消化不良、肌痛、感觉异常、月经过多、血清AST及ALT升高等。
 
其他适应症：Eltrombopag治疗普通的血小板减少症正在进行临床Ⅱ期试验，治疗放疗/化疗引起的血小板减少症正在进行临床Ⅲ期试验。
 
（2）AKR-501
AKR-501是安斯泰来制药公司开发第二个具有口服活性的TPO非肽类拮抗剂（目前属于生物制药公司MGI）。体外试验显示AKR-501能促进TPO依赖细胞系生长，增加CD34+细胞生成巨核细胞的能力，并能刺激移植人胎肝CD34+小鼠体内的人血小板生成。临床Ⅰ期研究表明，健康志愿者对AKR-501有很好的耐受性，没有严重的副反应发生。健康志愿者服用单个或多个剂量AKR-501后，血小板的产生呈现剂量和浓度相关效应。目前，AKR-501正处于治疗特发性血小板减少性紫癜(ITP)的Ⅱ期试验阶段。
 
3 TPO 激动剂抗体
通过给小鼠注射纯化的人c-Mpl 可制备抗TPO受体的单克隆抗体。这种单克隆抗体能与c-Mpl高亲和力结合，但不能促进TPO依赖细胞系生长。改变其分子大小和(或)二价受体结合特性,即可以成为良好的TPO激动剂。
 
（1）TPO微抗体[VB22Bsc(Fv)2]
微抗体VB22Bsc(Fv)2是由重链的可变区和轻链的可变区经过基因工程合成的共价抗体片断，由日本中外制药株式会社构建的。VB22Bsc(Fv)2与c-Mpl结合的能力仍然保留，但是由于相对分子质量更小，具有更高的激动剂活性。VB22Bsc(Fv)2激活TPO依赖细胞系的能力与rhTPO相当，半衰期为8-9h，不会引起自身抗体产生。没有人体试验研究的报道。
 
（2）区域亚单位转换TPO激动剂抗体(MA01G4G344)
MA01是从表达人c-Mpl的细胞免疫小鼠产生的IgG1单克隆抗体中克隆出来的，其刺激TPO依赖细胞系生长的活性较弱。把其重链恒定区转变为IgG4(MA01G4)，就可减少抗体依赖的细胞毒性反应和补体依赖的细胞毒性反应，其与受体结合的亲和力即激动剂活性却不会改变。当铰链区由IgG1转变为IgG3(MA01G4G344)，则其激动剂活性提高约10倍。体外试验显示MA01G4G344能刺激TPO依赖细胞系生长，促进人巨核细胞集落形成。含人Mpl的转基因小鼠接受单剂MA01G4G344后，其血小板升高可长达1个月左右。没有人体试验研究的报道。