水飞蓟素(silymarin ,SIL)是天然的黄酮木脂素类化合物,以往研究表明其具有稳定细胞膜、改善肝功能的作用，对急慢性肝炎、肝硬化和代谢中毒肝损伤有一定的疗效。但其结构特点决定了其口服吸收不完全，生物利用度较低。已有文献报道磷脂酰胆碱（phosphatidylchlide,PC）可与黄酮类化合物通过络合反应生成复合物，复合物的生成可改变黄酮类药物的溶解性能，增强其在胃肠道中的吸收，提高药物的生物利用度。本实验观察国产水飞蓟素磷脂酰胆碱复合物（silymarin phosphatidylcholide complex,SIL-PC）对肝损伤的保护作用，并与市售的复合物组成成分SIP（商品名益肝灵片）进行比较，为SIL-PC临床应用提供药效学依据。

 

1．1  药物与试剂   SIL-PC，由SIL与PC络合反应而成，批号：020402，武汉俊源医药研究所提供。益肝灵片，北京第四制药厂，规格：每片38.5mg。PC，四川英格尔公司。四氯化碳（CCl₄），南京化学试剂厂。D-氨基半乳糖（D-Galn），Merck公司。脂多糖（LPS），Sigma公司。卡介苗（BCG），卫生部上海生物制品研究所。AST，ALT试剂盒，南京建成生物工程研究所。

 

2．1  CCl₄肝损伤模型  小鼠80只，随机分为8组：正常对照组，CCl₄模型组，SIL-PC30，100，300mg·kg^-1组（剂量以SIL计，下同），SIL30，300mg·kg^-1组，PC480mg·kg^-1组（相当于300mg·kg^-1SIL-PC中PC的量）。动物ig给药，qd，连续3d。第2次给药同时，正常组ip10mL·kg^-1。末次给药后6h，小鼠摘眼球取血清，测定ALT和AST含量。

2．2  D-Galn肝损伤模型  小鼠70只，随机分为7组：正常对照组，D-Galn模型组，SIL-PC 400和800 mg·kg^-1组，SIL400和800 mg·kg^-1组，PC1280 mg·kg^-1组。正常组ip10mL·kg^-1生理氯化钠溶液，余下各组ip D-Galn 800 mg·kg^-1。给药组在ip D-Galn前后4h各ig给药1次，末次给药后20h，取血清测定ALT和AST含量。

2．3  免疫性肝损伤模型  小鼠90只，随机分为9组：正常对照组，BCG模型组，SIL-PC 100，200，400和800 mg·kg^-1组，SIL100和800 mg·kg^-1组，PC1280 mg·kg^-1组，正常组小鼠每只iv0.2mL生理氯化钠溶液，余下各组iv0.2mLBCG（含6×10⁷个活菌）。次日起开始ig给药，qd，d10每鼠ivLPS10μg，10h后，小鼠摘眼球取血清，测定ALT和AST含量。

 

实验数据以x±s表示，组间比较采用t检验，p<0.05表示差异有显著性。

 

ig给予SIL-PC30，100，300 mg·kg^-1，连续3d，可剂量依赖性降低小鼠血清AST，ALT活性，且100，300 mg·kg^-1组与CCl₄模型组比较，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）。但SIL（30或300 mg·kg^-1）组及PC组小鼠血清AST，ALT活性与CCl₄模型组比较，差异无显著性（P<0.05）。且SIL-PC 300 mg·kg^-1组作用明显强于SIL 300 mg·kg^-1组（P<0.01），见表1。

表1 SIL-PC对CCl₄肝损伤小鼠的保护作用

Tab 1 The protective effects of SIL-PC against CCl₄-induced

 

 

 

Liver damage in mice          n=10,x±s

 

组别            剂量/mg·kg^-1            AST/u·L^-1            ALT/ u·L^-1

 

对照组             —                   101.5±11.2            25.6±4.9

模型组             —                   327.8±83.5^a           103.4±26.8^a

SIL-PC             30                   265.1±78.3           110.3±30.4

SIL-PC            100                   241.8±67.1^b           85.6±32.9

SIL-PC            300                   151.3±46.5^c           49.6±18.5^cd

SIL                30                    294.6±47.9           95.3±30.5

SIL               300                    258.3±57.1            89.6±32.3

PC                480                    294.3±67.1            99.8±30.5

 

与对照组比较，a：P<0.01；与模型组比较， b：P<0.05，c：P<0.01；与相同剂量SIL组比较，d：P<0.01（下同）

ig给予SIL-PC400和800 mg·kg^-1，分别使肝损伤小鼠AST下降约24%和61%（P<0.01）；ALT下降约32%（P<0.05）和43%（P<0.01）。SIL800 mg·kg^-1组小鼠血清AST和ALT活性与D-Galn模型组比较，差异具有显著性（P<0.05），但SIL-PC作用明显强于SIL（P<0.01）。

表2  SIL-PC对D-Galn肝损伤小鼠的保护作用

Tab 2 The protective effects of SIL-PC against D-Galn-induced

Liver damage in mice

 

组别            剂量/mg·kg^-1            AST/u·L^-1            ALT/ u·L^-1

 

对照组             —                97.3±6.8               31.2±5.1

模型组             —                2307.5±684.3^a          986.3±327.5^a

SIL-PC            400                1746.5±496.5           668.1±236.4^b

SIL-PC            800                896.4±457.6^cd          458.6±241.8^cd

SIL               400                1886.5±503.2           785.4±280.1

SIL               800                1703.5±357.2^b          714.5±224.9^b

PC               1280                2158.9±796.3           1127.5±411.5

 

ig给予SIL-PC100~800 mg·kg^-1，SK可剂量依赖性降低免疫性肝损伤小鼠血清AST，ALT活性（P<0.05或P<0.01），且相同剂量的SIL-PC降低血清AST，ALT活性作用明显强于SIL（P<0.05或P<0.01），结果见表3。

表3 SIL-PC对免疫性肝损伤小鼠的保护作用

Tab 3 The protective effects of SIL-PC against

immunologic liver damage in mice

 

组别            剂量/mg·kg^-1            AST/u·L^-1            ALT/ u·L^-1

 

对照组             —                   89.5±9.4            27.5±9.3

模型组             —                   209.6±74.2^a         147.6±33.8^a

SIL-PC            100                   186.7±40.5          117.6±21.5b

SIL-PC            200                   165.2±38.1          86.3±22.8c

SIL-PC            400                   140.5±27.6^c         60.4±19.5^c

SIL-PC            800                   86.3±25.4cd         47.6±18.1^cd

SIL               100                   184.3±32.9          125.6±27.5

SIL               800                   146.4±30.8b         75.4±20.2c

PC               1280                   217.6±67.1          138.5±40.2

 

 

    SIL是天然的黄酮木脂素类化合物，具有抑制脂质过氧化，维持细胞膜稳定性等作用。PC为体内细胞的基本组成物质，与细胞膜的亲和力强，在一定条件下，可与黄酮类化合物络合，形成一种全新的复合化合物，复合化合物以PC为载体，使黄酮类化合物容易通过细胞的脂质膜。本结果显示：ig给药，SIL-PC在30~800 mg·kg^-1剂量范围内，对CCl₄，D-Galn及小鼠免疫性肝损伤均有显著的保护作用，且具有明显的量效关系，但在同样的试验条件下，相应剂量的其组成成分SIL及PC的保肝作用明显弱于SIL-PC 或未见保肝效应，从而从药效学方面证实了小鼠口服SIL-PC，提高了SIL的生物利用度，为SIL-PC临床应用提供了理论依据。