康瑞花,高顺强
[摘 要]
目的 研究神经生长因子在斑秃皮损中的表达,探讨其与斑秃发病的关系。
方法 应用免疫组化的方法检测了NGF 在30 例斑秃皮损中的表达和分布,以16 例正常人头皮为对照。
结果 斑秃皮损中NGF 的表达明显低于正常对照组。
结论 NGF 的表达减弱可能与斑秃的发病有关。
Expression of Nerve Growth Factor( NGF) in Lesion of Alopecia Areata
KANG Rui2hua ,GAO Sun qiang( Department of Dermatology , The Fourth Hospital Medical University , S hijiaz huang 050011 , China)
Abstract :
Objective To investigate the expression of nerve growth factor (NGF) and the relationship between the NGFand alopecia areata (AA) .
Methods The skin lesions of 30 case with AA were observed with immunohistochemistry and 16 normal scalp specimens were taken as controls.
Results The expressive intensity in the AA groups were significantly lower thanthose in controls.
Conclusion It suggested that decreaed NGF expression may be concerned in pathogenesis of AA.
神经生长因子(nerve growth factor ,N GF) 是典型的神经营养因子,是维持外周神经系统的交感神经元和感觉神经元存活和分化的必要因子。有人通过鼠皮片器官培养发现N GF 对毛囊角质形成细胞的周期性生长具有调节作用,说明该因子在正常毛发的周期性生长中起一定作用[1 ] 。但N GF 与斑秃发病的关系未见报道。为了探讨N GF 与斑秃的发病关系,我们采用免疫组化的方法对斑秃皮损和正常人头皮中N GF 的表达进行检测,结果报告如下。
1 资料和方法
1. 1 病例选择与分组 斑秃患者30 例,均为1999 年9 月～2001 年5 月经我院皮肤科临床及病理诊断确诊的门诊病人,其中男16 例,女14 例;年龄11～67 岁;病程2 天～14 年,平均3 年。在斑秃患者脱发区与正常头皮交界处用环钻取材。对照组16 例标本取自脑外科手术切口处。所有标本取后立即放入10 %福尔马林溶液内,石蜡包埋后备用。
1. 2 主要试剂 N GF 抗体(工作液浓度为1∶100) 和复合消化液。
1. 3 实验方法 采用免疫组化SP 法,抗原修复应用胰酶消化的方法。实验以PBS替代一抗作为空白对照,并设阴性对照。
1. 4 统计学处理方法 采用秩和检验。
2 结果
2. 1 结果判定标准 以胞质染有棕黄色颗粒为阳性。判定标准根据Shimizu 法[2 ]改良而成,着色范围以阳性细胞数占总细胞数的百分率记分: < 2 %为0 ,2 %～20 %为1 ,21 %～50 %为2 , > 50 %为3 ;着色强度依据深浅记分:无着色为0 ,浅着色为1 ,深着色为2 。上述两项相加为着色程度积分: < 2 为阴性,2～2. 9 为弱阳性( + ) ,3～3. 9 为阳性(2 + ) , ≥4 为强阳性(3 + ) 。在表皮层,每标本数3 个视野,对基底层、棘层和颗粒层分别进行统计,求其均数。在毛囊,每标本数1～3 个毛囊(因有的斑秃皮损标本中只有一个或两个毛囊) ,记分方法同前。
2. 2 结果发现 N GF 在正常头皮表皮的基底层细胞、靠近基底层的部分棘层细胞、毛囊、皮脂腺、汗腺表达明显(见图1 ,3) 。与正常对照相比,斑秃皮损区表达较弱(见图2 ,4) 。斑秃组患者皮损(表皮与毛囊) 中N GF 表达与正常对照组比较差异有显著性( UC 分别为2. 517 和1. 138 , P < 均0. 05) 。详见表1 。
图1 NGF 在正常头皮表皮层 图2 NGF 在斑秃皮损表皮基 图3 NGF 在正常头皮毛囊外 图4 NGF 在斑秃皮损毛囊无
呈强阳性表达 DAB 染 底层表达呈弱阳性 毛根鞘表达呈强阳性 表达DAB 染色
×200色 DAB 染色×200 DAB 染色×200
表1 两组表皮和毛囊中的NGF 表达程度比较
组别例数
阴性
( - )
弱阳性
( + )
阳性
(2 + )
强阳性
(3 + )
Uc P
斑秃组
表皮30 6 15 7 2 2. 517 < 0. 05
毛囊30 18 7 4 1 2. 138 < 0. 05
3 讨论
斑秃的发病机制目前仍不完全清楚,可能与毛发生长周期的紊乱有关。正常毛发生长周期分为三期:生长期、退化期和静止期,毛囊峡部神经网的密度随这种周期性变化而改变,在毛囊生长早期神经网密度最高,而生长晚期开始降低,到静止期降到最低[3 ] 。而N GF 对这些外周神经元的存活和分化具有重要作用[4 ] 。同时有研究发现,N GF 是角质形成细胞的有效丝裂原,可阻断内源性N GF 的分泌,诱导角质形成细胞凋亡[5 ] 。在胚胎发育期,表皮内陷形成毛囊,毛囊外根鞘相当于表皮基底层及棘层[6 ] ,因此我们重点对N GF 在表皮及毛囊中的表达进行研究。结果发现N GF 在斑秃皮损中的表达明显低于正常对照,我们推测N GF 的表达降低可能参与了斑秃的发病,其确切机制尚有待于进一步研究。
[ 参 考 文 献]
[1 ] 范卫新,朱文元. 神经及神经营养因子对毛囊生长的调控作用[J ] .国外医学皮肤性病学分册,1999 ,25 (6) :332 - 336.
[ 2 ] Shimzu M ,Saitoh Y, Itoh H. Immunohistochemical staining of Ha2rasoncogene product in normal ,benign ,and malignant human pancreatic2tissues[J ] . Hum Pathol ,1990 ,21 :607 - 612.
[ 3 ] Hordinsky MK. Relationship between follicular nerve supply and alope2cia[J ] . Dermatol Clin ,1996 ,14 (4) :651 - 660.
[ 4 ] 孙卫民王惠琴主编. 细胞因子研究方法学[M] . 北京:人民卫生出版社. 1999 ,694 - 704.
[ 5 ] Carlo P ,Anne RH ,Luisa B , et al . Autocrie nerve growth factor protectshuman keratinocytes from apoptosis through its high affinity receptor( TRK) :A role for Bcl22[J ] . The journal of investigative dermatology.1997 ,109 (6) :757 - 763.
[ 6 ]赵辨主编. 临床皮肤病学[M] . 第3 版. 南京:江苏科学技术出版社,2001 :6 - 74.
对照组
表皮16 1 5 6 4
毛囊16 3 5 4 4