内容导读：肌萎缩侧索硬化症(ALS)是一种选择性侵犯运动神经元的致命性、进行性神经系统变性疾病，多于40---50岁起病，男性患者多见，一般于发病后3～5年死亡。其发病机制尚未完全清楚，谷氨酸兴奋毒性引起神经元变性是其主要机制之一。利鲁唑是一种谷氨酸拮抗剂，目前被认为是惟一可延长肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者生命的药物,为探讨利鲁唑对肌萎缩侧索硬化症(ALS)谷氨酸的影响,现应用毛细管电泳一激光诱导荧光检测器测定肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者和对照组血浆及脑脊掖(CSF)谷氨酸水平，以及部分肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者服用利鲁唑后血浆谷氨酸水平，旨在了解肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者血浆、CSF谷氨酸的变化，以及利鲁唑对谷氨酸浓度的影响。

肌萎缩侧索硬化症(ALS)是一种选择性侵犯运动神经元的致命性、进行性神经系统变性疾病，多于40---50岁起病，男性患者多见，一般于发病后3～5年死亡。其发病机制尚未完全清楚，谷氨酸兴奋毒性引起神经元变性是其主要机制之一。利鲁唑是一种谷氨酸拮抗剂，目前被认为是惟一可延长肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者生命的药物,为探讨利鲁唑对肌萎缩侧索硬化症(ALS)谷氨酸的影响,现应用毛细管电泳一激光诱导荧光检测器测定肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者和对照组血浆及脑脊掖(CSF)谷氨酸水平，以及部分肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者服用利鲁唑后血浆谷氨酸水平，旨在了解肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者血浆、CSF谷氨酸的变化，以及利鲁唑对谷氨酸浓度的影响。

1资料和方法

I．I研究对象

1．1．1病例组：肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者45例(女l1例、男34例)，年龄18～79岁，平均(44．44±13．38)岁。其中31例患者行腰穿做CSF检查，对23例ALS患者进行了利鲁唑疗效观察研究。

1．1．2对照组：为同期行腰麻手术的非神经系统变性病患者46例(男31例、女15例)，年龄17～76岁，平均(41．24±12．50)岁。两组间性别和年龄差异无显著性。

1．2．2毛细管电泳的分离条件设定：
(1)开口石英毛细管总长度380mm，有效长度300mm，内径75／2m；
(2)电压28kV，温度2O。C；
(3)压力进样8S；
(4)每次进样之前，毛细管均要经HC1(O．1mol／L)，NaOH(O．1mol／L)、三蒸水、四硼酸钠缓冲液(O．03mol／L，pH9．8)冲洗，冲洗时间各2min。

1．3方法

1．3．1标本收集：病例组和对照组均抽取空腹外周静脉血3mL，取血浆，保存于一8O。C冰箱备用。常规腰穿留取2mLCSF，保存于一8O。C冰箱。其中23例ALS患者口服利鲁唑(50mg，2次／d)3个月后，取血浆标本。1．3．2衍生化反应过l星：取1．5mLEP管，加入100L谷氨酸标准溶液或待测标本、400LNaHCO。液(2Ommol／L，pH9．6)、10LFITC一丙酮溶液(6×10一mol／L)，混匀；室温、黑暗中反应16h。

1．3．3建立谷氨酸标准曲线：取2×10～、5×10一、l×10～、3×10～、5×10～、7×1O～、1×10mol／L谷氨酸标准溶液各100L，进行衍生化反应。在毛细管电泳仪上进行分离，测定相应的荧光强度(rela—tivefluorescesunits，RFU)。以谷氨酸浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制标准曲线。

1．3．4血浆和CSF标本的检测：所有血浆标本稀释100倍，CSF标本稀释1O倍。标本经去蛋白、衍生化反应后，应用CE—LIF测定谷氨酸浓度。

1．4统计学处理计量资料以±s表示，组间差别采用t检验和方差分析进行判断。全部数据均输入SPSSIO．0统计软件包进行统计分析。

2结果

2．1谷氨酸标准曲线：谷氨酸标准溶液与荧光强度的线性相关系数r=0．997，直线回归方程，一47．O12一4．816。

2．2ALS患者血浆和CSF谷氨酸水平检测ALS组血浆和CSF谷氨酸浓度[(75．65±2o．44)、(8．11±2．71)t2mol／L]与各自对照组[(57．96±3．40)、(3．81±0．86)t2mol／L]比较差异有显著性(P

2．3服用利鲁唑前后肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者血浆谷氨酸水平检测23例ALS患者服用利鲁唑后血浆谷氨酸水平[(66．19~10．27)t2mol／L]与服药前[(81．27±21．63)t2mol／L]比较差异有显著性(P

2．4服用利鲁唑前后肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者临床症状变化1例45岁男性患者以言语不清和吞咽困难为首发症状，半年后出现肢体无力。服药3个月后，肢体无力加重，但吞咽症状有所改善，如吞咽有力和饮水呛咳减轻。1例25岁男性患者以双上肢无力1年就诊。服药3个月后，自觉双手活动较前灵活。其余患者临床症状无明显改变。

3讨论肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者血浆、CSF谷氨酸浓度是否升高一直存在争议。Perry等嘲研究认为ALS患者血浆、CSF谷氨酸浓度并无升高。Shaw等嘲则认为肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者血浆谷氨酸水平不变而CSF谷氨酸浓度升肌萎缩侧索硬化症(ALS)组血浆和CSF谷氨酸浓度[(75．65±2o．44)、(8．11±2．71)t2mol／L]与各自对照组[(57．96±3．40)、(3．81±0．86)t2mol／L]比较差异有显著性(P

2．3服用利鲁唑前后肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者血浆谷氨酸水平检测23例肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者服用利鲁唑后血浆谷氨酸水平[(66．19~10．27)t2mol／L]与服药前[(81．27±21．63)t2mol／L]比较差异有显著性(P

2．4服用利鲁唑前后肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者临床症状变化1例45岁男性患者以言语不清和吞咽困难为首发症状，半年后出现肢体无力。服药3个月后，肢体无力加重，但吞咽症状有所改善，如吞咽有力和饮水呛咳减轻。1例25岁男性患者以双上肢无力1年就诊。服药3个月后，自觉双手活动较前灵活。其余患者临床症状无明显改变。

3讨论肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者血浆、CSF谷氨酸浓度是否升高一直存在争议。Perry等嘲研究认为ALS患者血浆、CSF谷氨酸浓度并无升高。Shaw等嘲则认为肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者血浆谷氨酸水平不变而CSF谷氨酸浓度升未能继续服药完成疗程。该研究结果与Couratier等的实验研究报道一致。在大鼠皮质神经元培养原液中加入ALS患者CSF所产生的兴奋毒性作用，可被利鲁唑减轻。肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者CSF的5O稀释液可引起神经元死亡，神经元存活率仅为45(对照组用健康者CSF同样处理，神经元存活率约88)，而加入0．5／~rnol／L利鲁唑后神经元存活率约为61DO]也有报道停止服用利鲁唑后ALS患者血浆、CSF谷氨酸水平又会升高。作者未曾观察到这种现象。

肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者血浆、CSF谷氨酸浓度升高间接证明了谷氨酸兴奋毒性作用，为肌萎缩侧索硬化症(ALS)治疗提供了参考依据。此研究证实抗谷氨酸药物利鲁唑可降低ALS患者的谷氨酸浓度。Dunlop等也发现利鲁唑可提高脊髓突触摄取谷氨酸的能力。此能力在转基因肌萎缩侧索硬化症(ALS)鼠的疾病早期明显存在，而在晚期则消失。因此，早期诊断、早期治疗对控制肌萎缩侧索硬化症(ALS)病情进展、延长肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者生命会有一定帮助。同时，检测肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者血浆、CSF谷氨酸浓度对肌萎缩侧索硬化症(ALS)患者应用利鲁唑治疗也会有更好的指导作用。