当前位置：药品说明书与价格首页 >> 抗肿瘤药 >> 常见肿瘤 >> 肺癌 >> 专业动态 >> IV期非小细胞肺癌组织βⅢtubulin表达与紫杉类化疗耐药相关

IV期非小细胞肺癌组织βⅢtubulin表达与紫杉类化疗耐药相关

2010-04-29 00:11:12 作者：新特药房来源：互联网浏览次数：135 文字大小：【大】【中】【小】

简介： 【摘要】目的：探讨Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC) βⅢtubulin表达与紫杉类化疗耐药性关系. 方法：回顾性分析75例接受以紫杉类化疗的Ⅳ期NSCLC临床病理资料. 免疫组织化学法检测肿瘤标本βⅢtubulin蛋白 ...

关键字：非小细胞肺癌；紫杉醇；微管蛋白；抗药性；免疫组织化学

【摘要】目的：探讨Ⅳ期非小细胞肺癌(NSCLC) βⅢtubulin表达与紫杉类化疗耐药性关系. 方法：回顾性分析75例接受以紫杉类化疗的Ⅳ期NSCLC临床病理资料. 免疫组织化学法检测肿瘤标本βⅢtubulin蛋白表达，并对化疗疗效及生存时间进行分析. 结果： βⅢtubulin阳性表达率（≥50%阳性染色细胞）为58.7% (44/75)，与性别、年龄及组织类型无关. 化疗有效率（CR+PR）为34.7%，βⅢtubulin高表达患者紫杉类化疗有效率低（25.0%)，进展率高(25.0%)，而βⅢtubulin低表达患者化疗有效率高（48.9%)，进展率低（6.4%)，P值分别为0.036和0.037. βⅢtubulin高表达者有较短的中位OS（12 mo）和PFS（8 mo），而βⅢtubulin低表达患者有较长的中位总生存期（OS）（15 mo）和无进展生存期（PFS）（11 mo）， P=0.018. 结论： βⅢtubulin高表达NSCLC患者对紫杉类药物耐药且预后不良.

【关键词】非小细胞肺癌；紫杉醇；微管蛋白；抗药性；免疫组织化学

　　【Abstract】 AIM: To investigatethe the relationship between the expression of βⅢtubulin protein and chemoresistance to taxane in nonsmall cell lung cancer (NSCLC). METHODS: Seventyfive patients with stage Ⅳ NSCLC treated with taxane were enrolled in this study and their clinical data were analyzed retrospectively. The expression of βⅢtubulin protein in tumor samples was detected by the immunohistochemical methods. The data of therapeutical effect and survival time were collected and analyzed. RESULTS: The βⅢtubulin positive staining rate（≥50% of stained cells） accounted for 58.7% (44/75). There was no correlation between βⅢtubulin positive expression and age, gender, and pathological type. The response rate (CR+PR) was 34.7%. Patients with βⅢtubulin overexpression displayed less response rate and more progression rate to taxane (response rate 25.0%, PD 25.0% in patients with ≥50% of stained cells vs response rate 48.89%, PD 6.5% in patients with <50%, P=0.036 and P=0.037, respectively). Overexpression of βⅢtubulin protein expression was correlated with shorter median overall survival (12 months） and progressionfree survival (8 months), While a low level of βⅢtubulin protein expression was correlated with longer median overall survival (15 months) and progressionfree survival (11 months), P=0.018. CONCLUSION: Overexpression of βⅢtubulin in tumor cells is associated with resistance to taxane and a poor prognosis in patients with NSCLC receiving taxane based chemotherapy.

　　【Keywords】 nonsmall cell lung cancer; paclitaxel; tubulin; drug resistance; immunohistochemistry

　　0引言

　　肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤，在恶性肿瘤相关死亡原因中占第一位. 非小细胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC）占所有肺癌病例的80%～85%. Ⅳ期患者约占NSCLC的40%，其5 a生存率约为1%. 紫杉醇和多西紫杉醇等与铂类联合的有效率也仅为30%～40%，肿瘤耐药性的产生是化疗失败的最主要因素. 研究表明，βⅢtubulin表达与紫杉类耐药密切相关［1］. 国内未见到βⅢtubulin蛋白表达与NSCLC紫杉类耐药方面研究报道，我们回顾性分析75例Ⅳ期NSCLC的βⅢtubulin蛋白表达，探讨其表达与紫杉类化疗效的关系.

　　1对象和方法

　　1.1对象

　　唐山市人民医院200310/200710有完整随访资料的Ⅳ期NSCLC患者75例，年龄≤75岁，体力状况Karnofsky（KPS）评分≥80分. 有标本供病理学检测. 男49例，女26例，男女比为1.88∶1；中位年龄为58（41～73）岁，≥58岁38例，＜58岁37例；鳞癌39例，腺癌36例. 化疗前行严格的分期检查，包括胸部CT，腹部CT或B超，全身骨骼核素扫描，常规检查心、肺、肝、肾等功能. 化疗采用以紫杉类＋DDP联合化疗方案：紫杉醇175 mg/m2 d1，DDP 75mg/m2 d2，每3 wk一疗程；多西紫杉醇75 mg/m2，顺铂75 mg/m2，每3 wk一疗程；连续2～6次. 病理组织分型按WHO 1998组织学分类标准，分期按1997年国际抗癌连盟(UICC)制订的标准. 随访200710，结果存活11例，死亡64例，生存期从确诊日至死亡或200710，以 mo 为时间单位，中位随访时间13（4～30）mo. 接受基于紫杉类化疗2～6周期，无CR患者，PR 26例（34.7%），总有效率（CR+PR）为34.7%，SD 36例（48.0%）,控制率（CR+PR+SD）为82.7%，PD 13例（17.3%）. 中位总生存期为13 mo，中位无进展生存期为9 mo. 一抗兔抗人βⅢtubulin mAb试剂盒购自美国Cell Signal公司，SP免疫组织化学试剂盒购于福州迈新有限公司.

　　1.2方法

　　采用SP免疫组化法检测βⅢtubulin蛋白表达，βⅢtubulin抗体工作浓度均为1∶100，以内皮细胞或神经细胞染色为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照，免疫组织化学流程参考Seve等［1-2］进行. 染色结果采用双盲法阅片判断，Olympus光学显微镜高倍镜下随机选择5个视野，每个视野记数100个细胞. βⅢtubulin主要均匀的位于正常细胞和肿瘤细胞的胞质，呈黄色或棕黄色颗粒，以内皮细胞或神经细胞染色为阳性参考标准. 染色强度0分为无染色，2分为强度至少相当于内皮细胞或神经细胞，2分以上的细胞为阳性细胞. 样品含<50%的阳性染色细胞为βⅢtubulin (-)即低表达，≥50%阳性染色细胞为βⅢtubulin (+)即高表达. 疗效按WHO 实体瘤标准判定分为：CR（complete response，完全缓解），PR（partial response，部分缓解），SD（stable disease，疾病稳定），PD（progression disease，疾病进展）. 近期客观有效为CR+PR，有效者应1 mo后检查确认. CR+PR+SD为肿瘤控制. 总生存期（overall survival，OS）为自治疗首日至死亡日或失访日，无进展生存（progression free survival，PFS) 指自治疗首日至病变进展日，均以 mo 计.

　　统计学处理：应用SPSS13.0统计软件包，蛋白表达与临床病理指标采用χ2检验；两蛋白表达之间的比较采用Spearman等级相关；预后判断采用KaplanMeier生存分析、Logrank时序检验分析方法；P<0.05为具有统计学意义.

2结果

　　75例NSCLC组织βⅢtubulin (+)，即高表达率为58.7%(44/75)，其中男性高表达率为61.2%（30/49），女性53.8%（14/26）；鳞癌53.8%（21/39），腺癌63.9%（23/36）；≥58岁68.4%(26/38)，＜58岁48.6%(18/37)；经χ2检验，P＞0.05，无统计学意义（图1A,B）. βⅢtubulin低表达患者有效率为48.9%，而βⅢtubulin高表达有效率为25.0%，差异显著(P=0.036). βⅢtubulin低表达患者进展率为6.4%，βⅢtubulin高表达者为25.0%，有统计学意义(P=0.037). βⅢtubulin低表达患者中位OS和PFS分别为15和11 mo，而βⅢtubulin高表达者分别为12和8 mo，经Logrank检验，有统计学意义（P＜0.05，图2A，B）.

　　3讨论

　　化疗是晚期NSCLC的主要治疗手段，而紫杉类药物（包括紫杉醇和多西紫杉醇）是NSCLC的常用化疗药物. 紫杉类的耐药性（包括原发性耐药和继发性耐药）是限制其临床应用的主要原因之一. 微管(microtubule)是构成细胞骨架的主要成分，由13 条原纤丝纵向排列构成中空的圆柱状结构，每条原纤丝是tubulin α和β形成的异二聚体组装成的多聚体. 有研究认为βtubulin基因TUBB突变可能与紫杉类耐药相关. TUBB突变可能通过两种机制导致紫杉类药物的耐药：①TUBB基因突变影响了tubulin与紫杉类药物的结合位点，但微管蛋白功能却不受影响；②TUBB基因突变改变了与微管聚合相关的微管蛋白二聚体的重要区域，削弱了相互作用，导致微管不稳定. 但是，关于TUBB基因突变的继续研究却得出了不同的结论. Kelley等［3］通过对25 种NSCLC细胞株和20例原发性NSCLC研究发现，TUBB突变并不常见，先前的关于NSCLC中TUBB基因突变的研究可能是假基因(pseudogenes)共扩增引起的人为现象. 已知的βtubulin假基因分布在同源染色体6和1，8，19染色体上. 所以那种表面上的TUBB突变与耐药、预后相关的假象可能与肿瘤的非整倍性相关. Mozzetti等［4］用半定量RTPCR，实时定量PCR和定量免疫组织化学法检测41例晚期卵巢癌，发现紫杉醇耐药组βⅢtubulin mRNA水平和蛋白蛋白表达显著增高（P<0.01）. Rosell等［5］用定量PCR法检测28例接受紫杉醇+卡铂化疗的NSCLC患者石蜡组织中βⅢtubulin mRNA的表达，βⅢtubulin mRNA低水平（cutoff=0.5)组PR为55.6%（5/9），βⅢtubulin mRNA高水平组PR率为9.1%(1/11)，P=0.05. 15例βⅢtubulin mRNA低水平（cutoff=1)患者中位进展时间为6.8 mo，7例高水平患者为4.2 mo. Paradiso等［6］用免疫组织化学法分析70例基于紫杉醇化疗的晚期乳腺癌，发现βⅢtubulin蛋白低表达组肿瘤控制（CR+PR+SD）率和进展（PD）率分别为98%和2%，而高表达组控制率和进展率分别为62%和38%(P=0.000)，有显著性差异. Cox回归分析显示，在基于紫杉醇化疗的晚期乳腺癌患者临床进展相关因素中，βⅢtubulin的OR值为28.789，95% CI（3.212~28.072），P=0.004. 本组病例显示，近期疗效中βⅢtubulin低表达患者有效率为48.89%，而βⅢtubulin高表达有效率为25.0%，差异显著(P=0.036). βⅢtubulin低表达患者进展率为6.45%，而βⅢtubulin高表达者为25.0%(P=0.037)，均有统计学意义. 与文献［4-6］结果基本一致，即βⅢtubulin高表达NSCLC患者紫杉类化疗后控制率低，进展率高，而βⅢtubulin低表达患者控制率高，进展率低. 表明βⅢtubulin表达与紫杉类化疗耐药相关. 在生存期方面，KaplanMeier 分析显示：βⅢtubulin低表达NSCLC患者中位OS和PFS分别为15和11 mo，而βⅢtubulin高表达者分别为12和8 mo，经Logrank检验，有统计学意义(P＜0.05). 与文献［1，5］结果一致，即βⅢtubulin高表达患者OS和PFS短，而βⅢtubulin低表达患者OS和PFS长，表明βⅢtubulin高表达是紫杉类化疗后患者预后不良的一个指标. 综上所述，Ⅳ期NSCLC标本βⅢtubulin高表达者对紫杉类药物耐药，βⅢtubulin低表达NSCLC患者对紫杉类药物敏感. βⅢtubulin高表达NSCLC患者预后不良.

【参考文献】