1材料与方法

1.1药物与试剂肝复乐:由三七、黄芪、柴胡、甘草等8种中药按一定比例配伍后经现代工艺制备而成的浸膏剂。强肝胶囊，批号:20051207，石家庄东方药业公司生产;四氯化碳:上海新中化学试剂厂产品;ALT,AST,Hyp测定试剂盒:南京建成生物工程研究所产品;HA,LN，PCl放射免疫分析测定盒上海海军医学研究所产品

1.2动物SD大鼠，体重(140110)g,雄性，由安徽医科大学实验动物中心提供。合格证号:皖实动第02号

1.3主要仪器CL20A全自动高速冷冻离心机，湖南仪器仪表总厂离心机厂生产;内切式组织匀浆机，浙西机械厂产品;岛津全自动生化分析仪，日本产;CC一11丫放射免疫计数器，中国科技大学科技实业总公司产品Ivanax多功能显微镜，日本Olym-pus产品等

1.4大鼠四氯化碳致化学性肝纤维化模型的制备及分组给药SD大鼠随机分为:正常组、模型组、肝复乐、小剂量组(3.5g-kg)、肝复乐大剂量组(7.0g-kg)、阳性对照组(强肝胶囊0.4g-kg。将四氯化碳与高压灭菌精制花生油按1:9比例配成10%油剂，自造模之日起，除正常组外，其它各组大鼠按0.5ml-100g体重背部皮下注射10%四氯化碳精制花生油溶液，每周三、周六各1次，连续13周。造模第5周始，正常组、模型组给予蒸馏水，其他各组动物灌胃给药(1ml/110g，每日一次，连续9周各组动物每周称重一次，根据体重变化，调整给药剂量。

1.5病理及生化指标的检测于第13周末次给药2h后，用水合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉取血，3000prm离心15min，取血清-20℃保存备用。拉颈处死动物，立即摘取部分肝脏制备肝匀浆待测;另取一小块肝脏组织经10%甲醛固定，HE染色行病理形态学检查。

1.6统计分析各组数据均以表示，计量资料组间比较采用t检验。

2结果

2.1肝复乐对化学性肝纤维化大鼠血浆ALT,AST水平的影响取各组动物血消，按试剂盒说明书要求操作，在全自动生化分析仪上测定大鼠血清ALT沪ST的活性。与正常组比较，模型组血浆ALT,AST水平显著升高;肝复乐和强肝胶囊均能显著降低血浆中升高的ALT,AST水平。
表1肝复乐对CC甄肝纤维化模型大鼠血桨ALT,AST的影响x士s)

2.2肝复乐对化学性肝纤维化大鼠血清HA,LN,PCⅢ和肝Hyp含量的影响取各组大鼠血清，按试剂盒说明书要求，采用放射性免疫实验方法，在丫-计数器上测定HA,LN,PCⅢ水平。肝组织Hyp含量测定:每份标本称取m肝100mg,加入双蒸水2.5ml，匀浆200Qrmin4,50s,4℃加入等体积的12mol.L-4HC1,98℃水解18h，过滤，取水解液100μg烘干，经与氯铵T溶液、欧氏溶液50℃、30min水浴反应，紫外分光光度仪558nm处测定反应液A值，计算标准曲线回归方程及样品Hyp含量.肝组织Hyp含以"Hypmg'g肝组织”表示。结果见表2。

与正常组相比，模型组大鼠血清HA,LN,PCⅢ和肝匀浆Hyp含显著升高，肝复乐大剂里组和强肝胶囊可显著降低HA水平，同时，肝复乐和强肝胶囊均可降低血浆中的LN,PCⅢ和肝匀浆Hyp含量

2.3肝复乐对大鼠化学性肝纤维化肝脏病理组织学的影响病理组织学结果显示，正常组肝组织的肝小叶结构完整，肝细胞排列呈索状，围绕中央静脉呈放射状排列，肝细胞呈多边形。模型组可见肝细胞变性，细胞质中有大量空泡，肝内有类假小叶样结构形成，间质内均可见较明显的炎细胞浸润，表明四氯化碳可致大鼠肝组织严重的纤维化。肝复乐大、小剂量组及强肝胶囊组均不同程度明显减轻四氯化碳所致的肝纤维化程度，明显的减轻肝细胞损伤、肝细胞再生及间质炎细胞浸润等病理组织学的变化

3讨论

肝复乐是名老中医的临床经验方，由三七、黄芪、柴胡、甘草等中药配伍组成，方中诸药合用，具有活血化癖，疏肝解郁之功效。活血化瘀法可抑制结缔组织的异常增生，促进增生的结缔组织的吸收与分解;扶正补益药可保护肝细胞、调控机体免疫功能，同时还影响结缔组织的代谢。肝复乐组方中活血化淤与扶正补益药同用可取得相得益彰之效ALT,AST主要为细胞内酶，正常机体血消中此两种酶活力很低。血清中ALT,AST活力测定可灵敏反映肝功能变化，常作为肝功能检测的敏感指标。本实验结果表明，肝复乐能明显降低肝纤维化大鼠血清ALT,AST活力，提示其可保护肝细胞，减轻肝损伤

肝纤维化时血清HA,LN,PCⅢ的含量明显升高，其升高的程度与肝纤维化程度呈正相关，能较好地反映肝纤维化进展情况，与肝组织病理表现基本一致。本实验结果表明，肝复乐可显著降低肝纤维化大鼠血清HA,PCⅢ、LN含量，提示肝复乐可通过降低HA,KI、LN等细胞外基质的合成或加快其代谢清除而减少细胞外基质在肝脏的沉积，从而发挥其抗肝纤维化的作用.

Hyp是一种非必需氨基酸，肝纤维化时，胶原合成速度超过其分解的速度，使肝脏中胶原蛋白含呈增加。血中物p含盒易受其他因素的影响，而肝组织中物Hyp含量较稳定，能可靠反映肝纤维化程澎气本实验采用直接测定肝组织中Hyp含里的方法来推测肝纤维化程度，结果表明，肝复乐能显著降低肝纤维化大鼠肝组织Hyp含里，提示肝复乐能通过减少肝组织胶原含量而减轻肝纤维化程度.