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直肠癌中vegf与pcna的表达及其临床意义

2010-03-18 14:51:44 作者：新特药房来源：互联网浏览次数：42 文字大小：【大】【中】【小】

简介： 【摘要】目的通过检测直肠癌中vegf及pcna的表达，探讨其对直肠癌的发生、发展及其对预后的意义。方法应用免疫组化s|p法，检测直肠癌中vegf及pcna的表达。结合组织学分类、淋巴结转移等分析。结果 ...

【摘要】
目的通过检测直肠癌中vegf及pcna的表达，探讨其对直肠癌的发生、发展及其对预后的意义。方法应用免疫组化s|p法，检测直肠癌中vegf及pcna的表达。结合组织学分类、淋巴结转移等分析。结果正常结肠粘膜中vegf及pcna的阳性率分别为15.4%及6.7％，直肠腺瘤中vegf及pcna的阳性率分别为16％及28％，直肠癌中vegf及pcna的阳性表达率分别为45.5％及84.9％。结论综合检测vegf与pcna，对于直肠癌的诊断、治疗及预后有较明显的指导意义。

【关键词】直肠肿瘤；血管内皮细胞生长因子；增殖细胞核抗原;免疫组织化学

the expression of vegf and pcna in rectal cancer and its clinical significance

xie min,wu jian|ping,xia xiao|qin,et al

department of abdominal and urinary surgery,hubei cancer hospital,wuhan430079,china

abstract: objective to explore the detection of vegf and pcna in colorectal cancer to the significance of genesis,development and prognosis. methods by means of immunohistochemistry technique(s|p)，to detect the expression of vegf and pcna in colorectal tissues, and combinated with histologic type and lymph node metastasis.results the positive expression rate of vegf and pcna of normal colorectal tissue,colorectal adenoma and colorectal cancer are 15.4%, 16%,45.5％, 6.7%, 28% and 84.9％ respectively.conclusion combinated detection of vegf and pcna can play an obviously direction role in diagnosis,treatment and prognosis of rectal cancer.

key words:rectum neoplasms; vascular endothelial growth factor;proliferating cell nuclear antigen;immunohistochemistry

直肠癌作为大肠癌的一部分，在癌症病人中所占比例较大，随着人们生活水平的提高，近年来有升高的趋势。新近的研究表明肿瘤的发生不仅与细胞的增殖有关，而且与肿瘤细胞的凋亡及血管形成等有关。作者应用免疫组化对直肠癌中vegf及pcna的表达情况进行了研究，探讨直肠肿瘤细胞增殖、凋亡及血管形成的规律，从而进一步阐明其在直肠肿瘤发生中的作用及其对直肠癌早期诊断和预后的意义。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料收集湖北省肿瘤医院病理科1998～2000年经外科手术切除及肠镜活检的直肠标本，其中腺瘤（包括绒毛状腺瘤）25例，男14例，女11例，年龄20～74岁，平均43岁；腺癌66例，男36例，女30例，年龄28～77岁，平均49岁，15例正常粘膜取自距肿瘤边缘5cm以上的切缘。所有标本均经10％福尔马林固定，石蜡包埋，4μm连续切片，分别作h.e染色及免疫组化标记，he切片按1981年《全国大肠癌病理协作研究统一规范》复诊，所有病例术前及检查前均未接受放疗及化疗。

1.2 试剂及免疫组化方法小鼠抗人单克隆抗体vegf及pcna（pc10）为美国santa crutz公司产品，s|p免疫组化试剂盒购自福州迈新生物制品有限公司，按试剂盒说明书操作，用pbs代替一抗作阴性对照，已知直肠癌阳性切片作阳性对照。免疫组化步骤如下：

(1)切片脱蜡至水。

(2)蒸馏水新鲜配置3％h2o2室温5～10min灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。

(3)微波修复抗原：将切片浸入0.01m枸橼酸盐缓冲液，ph6.0，微波炉加热至96℃～100℃，持续20～30min，冷却后进行下一步。

(4)滴加抗原修复液，室温10min。蒸馏水洗3次。

(5)滴加正常血清封闭液，室温20min。去掉多余液体，不洗。

(6)滴加适当稀释的一抗（vegf及pcna），室温120min。0.01m pbs洗2min× 3次。

(7)滴加生物素化山羊抗小鼠igg，20oc20min,0.01m pbs洗2min ×3次。

(8)滴加试剂sabc，20oc20min，0.01m pbs洗5min× 4次。

(9)dab显色。

(10)苏木素轻度复染。脱水、透明、封固。显微镜观察。

1.3 结果判断免疫组化染色阳性反应为棕黄色－黄色， pcna定位于细胞核，vegf定位于细胞浆（图略），pcna用增殖指数（proliferative indices,pi）表示，pi是指pcna阳性细胞占肿瘤细胞的百分率，并将之分为四级，1%～25％为i级，26%～50％为ii级，51%～75％为iii级，≥75％为iv级。其中i～ii级为弱阳性，iii～iv级为强阳性。

2 结果

2.1 vegf和pcna在直肠粘膜及癌组织中的表达结果正常直肠粘膜上皮细胞中可见部分细胞呈pcna的低水平表达，且主要位于粘膜基底层细胞，腺癌则是肿瘤组织中癌细胞胞核中有表达，直肠腺癌中vegf及pcna的阳性表达率分别为45.5％及84.9％，两种抗体的详细表达情况见表1、2。表1直肠组织中vegf的表达表2直肠组织中pcna的表达经统计学检验， pcna在直肠癌中的表达与在正常粘膜及直肠腺瘤中的表达相比p值<0.01,有极显著性差异，而vegf在直肠癌中的表达与在正常粘膜及直肠腺瘤中的表达相比p值<0.05,有显著性差异。

2.2 两种抗体表达与淋巴结转移的关系,见表3

表3 vegf及pcna表达与直肠癌淋巴结转移之间的关系经统计学检验， vegf的表达与淋巴结转移之间有极显著性差异（p<0.01），但pcna的表达与淋巴结转移之间则无显著性差异（p>0.05）。

2.3 两种抗体表达与腺癌分级之间的关系,见表4 表4vegf及pcna表达与直肠腺癌分级的关系经统计学检验，两种抗体的表达与直肠癌分级之间均无显著性差异（p>0.05）。

3 讨论

一般来说，大肠癌的发病随年龄增长而迅速上升。20世纪70年代青年人大肠癌是当时我国大肠癌流行病学特点之一。随着大肠癌发病率的迅速上升，近年来年龄构成已与欧美相近，说明其与饮食、生活习惯的改变有关。武汉地区属内陆地区，青年人大肠癌依然常见，临床医师不能以病人年轻而忽视大肠癌的可能。在大肠癌低发区，直肠癌远比结肠癌多见，可占80％左右，且直肠癌可通过简单易行的直肠指检或肛门镜发现。

大肠癌两性发病率相似，在美国男、女性大肠癌均居第3位常见癌。1995年上海市区新发大肠癌病人中男性1057人，女性987人，男性大肠癌为第4位常见癌，女性大肠癌居第2位常见癌症。本组男性大肠癌病人36例，女性大肠癌病人30例，男、女性比例相近。

vegf是一种特异性作用于内皮细胞的多功能因子，对诱导和调节肿瘤血管形成有重要作用。其主要生物学功能有：（1）能增加血管尤其是微血管的通透性，为血管形成过程中多种细胞迁移提供一个纤维网络；（2）vegf是一种选择性促血管内皮细胞有丝分裂原，直接刺激内皮细胞增殖，并产生纤维蛋白原激活剂和胶原酶，这不仅可促进内皮细胞活动，有利于血管生成，而且还有利于肿瘤细胞脱落进入血管或向邻近组织扩散，为肿瘤的浸润转移创造条件，vegf对肿瘤血管形成的促进作用已在多种肿瘤中得以证实，本实验结果为进一步探讨直肠癌的抗血管生成治疗奠定了基础，vegf可作为抗癌治疗的新靶点，针对vegf及其受体的抗血管治疗，为肿瘤防治开辟了另一新途径。broll 等[1]认为血清中vegf浓度与肿瘤的体积和大小明显相关，血清vegf浓度远高于正常组织定量的患者预后差，werther等[2]认为血清中vegf浓度高则可预测其生存期短。基于这个理由，vegf可作为病人的预后指标。由于其低敏感度而不是对大肠癌有效的肿瘤标记，但如和cea结合则可明显提高术前诊断敏感性。akagi等[3]发现vegf阳性组病人的生存时间比vegf阴性病人短，但无统计学差别，但是vegf可能在大肠癌的淋巴扩散中起重要作用,我们的研究也证实了这一点。lissoni等[4]发现大肠癌患者血液中vegf的高浓度及较差的预后不仅与vegf诱导的新生血管形成有关，还与vegf相关的免疫抑制有关。

pcna是近年来发现的聚积于s期复制细胞的胞核中的周期依赖性蛋白，作为dna聚合酶的辅助蛋白直接参与细胞增殖过程的dna复制，其表达反映了细胞的增殖活性，kovac认为pcna可作为大肠癌的独立的预后因素。watanabe [5]发现进展期大肠癌患者pcna阳性细胞率明显高于早期癌症患者。本研究中pcna的表达阳性率较高（84.9%）与刘勇等对大肠癌的研究结果相似。pcna的阳性表达（尤其是强阳性）意味着肿瘤细胞处于增殖期，而处于增殖期的肿瘤对药物治疗最敏感，有利于指导临床化疗。本研究中pcna在肿瘤淋巴结转移及分级上未表现出显著性差异，说明其没有促进肿瘤分化与肿瘤转移的作用，符合其作用原理。

从对以上两种因子pcna及vegf的讨论中，我们可以看出它们在直肠癌的发生、发展中有着不同的作用机理。在肿瘤的发展及转移中vegf起着极大的作用，vegf的表达在直肠癌的肿瘤分级及转移中有着显著性差异，检测vegf有助于了解肿瘤的发生、发展状况与淋巴结转移的情况。pcna作为与细胞周期相关的蛋白，其阳性表达率对直肠癌的药物治疗具有指导意义。综合检测vegf与pcna，对于直肠癌的诊断、治疗及预后有较明显的指导意义。

【参考文献】