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生长抑素类似物奥曲肽对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响

2010-06-09 01:00:06 作者：新特药房来源：互联网浏览次数：38 文字大小：【大】【中】【小】

简介： 【摘要】目的研究生长抑素类似物奥曲肽对卵巢癌细胞SK-OV-3增殖和凋亡的作用。方法将奥曲肽（浓度分别为1.563、3.125、6.25、12.5、25、50mg·L-1）作用于卵巢癌细胞，用MTT法检测细胞活性，同时通 ...

关键字：生长抑素类似物卵巢癌细胞奥曲肽细胞凋亡

【摘要】
目的研究生长抑素类似物奥曲肽对卵巢癌细胞SK-OV-3增殖和凋亡的作用。方法将奥曲肽（浓度分别为1.563、3.125、6.25、12.5、25、50mg·L-1）作用于卵巢癌细胞，用MTT法检测细胞活性，同时通过碘化丙啶（PI）染色，采用流式细胞仪检测细胞凋亡比率。结果奥曲肽对SK-OV-3细胞的增殖抑制效应具有剂量依赖性特点，并能诱导SK-OV-3细胞凋亡。结论奥曲肽对SK-OV-3细胞增殖具有重要调控作用，生长抑素类似物可促进卵巢癌细胞凋亡。
【关键词】生长抑素类似物卵巢癌细胞奥曲肽细胞凋亡
【Abstract】 Abjective：To explore the effect of somatostatin octreotide on proliferation and apoptosis of ovarian cancer cell. Methods：SK-OV-3 cells were treated with octreotide （1.563、3.125、6.25、12.5、25、50mg·L-1 respectively ）. The effects of octreotide on prolifieration of SK-OV-3 cells were assessed by MTT assay. Cell apoptosis also was detected by flowcytometry. Results：Octreotide inhibited the proliferation of SK-OV-3 cells in dose-dependent manners， and induced cell apoptosis. Conclusions：Somatostatin receptor plays an important role in regulating proliferation of SK-OV-3 cells， and somatostatin can induce cell apoptosis.
【Key words】 Somatostatin analogue Ovarian cancer cell Octreotide Apoptosis
化疗已成为Medicine治疗卵巢癌的主要方法，目前国内、外所使用的药物包括铂类、紫杉醇和其他二线化疗药物，尽管这些药物对治疗有一定的疗效，但紫杉醇价格极其昂贵，其他药物很容易耐药，因此寻找效果好、副作用小的化疗药物变得非常重要。奥曲肽是一种生长抑素类似物，近年来有研究人员将其用于消化道类癌症的治疗，对初发、复发病例均有一定疗效。本研究以卵巢癌细胞株SK-OV-3为研究对象，观察奥曲肽对卵巢癌细胞生长的抑制作用并对其相关机制进行探讨，为临床应用提供实验>参考。
1　材料与方法
1.1　试剂　
善宁（醋酸奥曲肽注射液），0.1mg/1ml/支，进口药品注册证号：H20030555，诺华制药生产，批号：50076；四甲基偶氮唑盐（MTT），购自sigma公司；碘化丙啶（PI），购自上海华舜生物工程有限公司。
1.2　细胞株及培养　
人卵巢癌细胞株SK-OV-3购自china中国gongxue科学院肿瘤研究所。于37℃、5%CO2饱和湿度培养，培养基为含10%胎牛血清（Hyclone Laboratoreis Inc.提供，优等，批号：AMC15818）的DMEM（Invitrogen Co.提供，批号：1290007），0.25%胰蛋白酶（上海华美生物公司）消化传代。
1.3　MTT法检测细胞活性　
将浓度为5×104个/ml卵巢癌细胞SK-OV-3，接种于96孔平底培养板中，每孔100μl，培养24h后，再分别设空白对照组和不同浓度药物组（1.563、3.125、6.25、12.5、25、50mg·L-1），每组设3个复孔。置37℃，体积分数为5％CO2培养24h，于结束前4小时加入MTT 20μl/孔，4h后弃上清液，加入二甲基亚砜（DMSO）100μl/孔，振荡10min左右，置酶标仪测定OD值，波长为450nm。按下列公式pc计算细胞抑制率，评价药物对卵巢癌细胞增殖的抑制作用。
细胞抑制率（%）=（正常对照组平均OD值-实验组平均OD值）/正常对照组平均OD值×100%
1.4　PI染色法检测细胞凋亡　
经1.563、3.125、6.25、12.5、25、50mg·L-1奥曲肽处理24h的SK-OV-3细胞，经0.25%胰蛋白酶消化5min，1500rpm离心3min，收集细胞于1.5mlEP管中，用PBS洗3次后3500 rpm离心5min；再用200μlPBS重悬细胞，边涡漩振荡边滴加70%预冷4℃乙醇，共加1ml，振荡均匀后于4℃过夜。3500 rpm离心5min，弃固定液。每个样品用500μl PBS重悬细胞，3500 rpm离心5min，洗涤2次。弃上清液，用200μlPBS重悬细胞，吹打均匀，每个样品加800μlPI染液，4℃染色30min。最后，用400目尼龙网将细胞悬液过滤至流式细胞管中，上机检测，用CELL QUEST软件分析实验结果。
1.5　统计学分析　
实验数据以x±s表示，结果经Mircrosoft Excel 2000进行统计学处理，并进行TTEST分析，t值法比较组间差异的显著性。