摘要: 目的：探讨沙培林对浅表性膀胱移行细胞癌患者血液中血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）的影响。方法：采用双抗体夹心ELISA法对30例浅表性膀胱移行细胞癌患者和15例正常人血液中VEGF的检测，观察浅表性膀胱移行细胞癌患者在沙培林灌注治疗6周后血液中VEGF的变化。结果：治疗前患者血液中VEGF水平明显高于对照组，治疗6周后VEGF水平显著降低，但仍较对照组高。结论：沙培林膀胱灌注能够显著降低患者血液中VEGF水平，是一种有效的杀死膀胱肿瘤细胞的方法。关键词:浅表性膀胱移行细胞癌；血管内皮生长因子；沙培林；膀胱灌注 Study on VEGF in blood of the patients with superficial bladder Transitional Cell carcinoma after perfusion of sapylin [Abstract] Objective To study the expression of the VEGF in blood of the patients with superficial bladder transifional cell carcinoma after perfusion of Sapylin. Methods: PAP ELISA method was used to study the VEGF in 30 cases of superficial bladder transifional cell carcinoma and in 15 cases of nomal people as control. To study the change of VEGF in blood of the pretherapy and post-perfusion 6 weeks patients with superficial bladder transifional cell carcinoma. Result: VEGF level in blood of the patients with superficial bladder transifional cell carcinoma is higher than that of nomal people .After 6 weeks perfusion of sapylin, VEGF level in blood decreased obviously ,but it is still higher than nomal people. Conclusions: Perfusion of bladder of sapylin can obviously decrease the level of VEGF in blood .So,it is an effective method to kill the cells of superficial bladder transifional cell carcinoma. Key word: superficial bladder transifional cell carcinoma; VEGF; sapylin; perfusion of bladder

沙培林是经青霉素处理的溶血性链球菌A群722低毒株的冷冻干燥剂，国外OK-432的同类产品，具有明显的免疫学活性，不但能通过刺激机体产生细胞免疫和体液免疫以达到抗肿瘤的作用，而且在与肿瘤细胞接触时破坏肿瘤的RNA过程，从而使肿瘤细胞软化崩解。在本次研究中，我们对2002年8月至2004年5月间30例浅表性膀胱移行细胞癌患者术后应用沙培林膀胱灌注预防复发，并对其血液中VEGF进行检测，探讨沙培林经膀胱灌注预防膀胱癌复发的作用。

报告如下：

1 对象和方法

1．1 组织标本 30例浅表性膀胱移行细胞癌患者中，初发28例，复发2例。男性25例，女性5例，年龄38岁—81岁，平均56岁，单发27例，多发3例。经尿道膀胱电切术24例，膀胱部分切除6例。病理分级按WHO标准：Ⅰ级 15例，Ⅱ级9例，Ⅲ级 6例。临床分期按UICC-TNM标准，Tis─T1 ，30例均为浅表性膀胱移行细胞癌。

1．2 方法

1．2．1 膀胱灌注方法术后7—14天后开始进行沙培林膀胱灌注。排空膀胱后，用生理盐水50毫升加沙培林（山东鲁亚制药有限公司）2 KE经尿管灌入膀胱保留2小时左右，每周1次，连续6次，之后每月1次，连续8次。共14次。

1．2．2 检测方法：所有患者在入院后第2天清晨抽空腹血4毫升。术后灌注6次后再次抽血。均用EDTA做抗凝处理，1500r/min离心15min,取血清检测。另取正常人群15例为对照组。采用双抗体夹心ELISA法。商品试剂盒为美国sigma公司产品（Sigma Chemical Company St.Louis.Mo）。实验步骤按试剂盒里的说明书进行。

1．2．3 统计方法：采用SPSS统计软件，数据以均数±标准差表示，组间对比用t检验。

2结果：治疗前患者血清VEGF水平较对照组明显增高（P<0.01）；治疗6周后VEGF水平显著降低（P<0.01），治疗组与对照组比较VEGF水平仍增高（P<0.01）。见表1。表1 对照组和沙培林膀胱灌注组血清中的VEGF的关系（pg/ml） 组别 例数 治疗前 灌注6周后 对照组 15 28.16±2.37 ==== 膀胱肿瘤组 30 57.33±5.50 41.18±3.77

3 讨论： 肿瘤在生长过程中，必须诱发新生血管生成才能维持生长和转移。瘤体直径小于2mm时可从现有血管的滤渗而得到足够营养，进一步生长则需要形成新生的毛细血管。在膀胱移行细胞癌（bladder transifional cell carcinoma， BTCC）中肿瘤的复发、生长、增殖、转移等也必须由新生血管来提供必要的营养物质。VEGF是1989年被分离鉴定的具有高度特异性的血管内皮促有丝分裂素（同源二聚体糖蛋白），可直接导致肿瘤血管的生长①②。抑制VEGF可明显抑制某些恶性肿瘤生长。在膀胱癌患者中VEGF与血管内皮细胞上皮的两种特异受体flt-1和KDR结合，选择性的促进血管内皮细胞的有丝分裂，同时增加血管的通透性③④，是在肿瘤的复发、生长、浸润和转移过程中不可缺少的细胞因子⑤。VEGF在膀胱癌组织中的表达较正常膀胱组织者显著增高，它能独立预测膀胱癌治疗后复发、转移的风险⑥。膀胱内灌注免疫治疗是保留膀胱治疗方案的重要组成部分，被证明是最有效的灌注治疗。

    免疫增强剂BCG是目前公认最有效的药物，但约30%的患者应用无效，有53%高危患者灌注BCG后肿瘤进展,长期生存率约63%⑦。研究证明沙培林可以活化中性粒细胞、巨噬细胞、NK细胞，诱导产生IL-2、IL-6、IL-12等多种细胞因子，调节机体的抗肿瘤免疫反应。同时还能与癌细胞接触后破坏其RNA过程，直接杀死癌细胞⑧。沙培林可通过细胞免疫和体液免疫两个途径达到预防膀胱肿瘤复发的目的，其增强机体免疫、抗肿瘤的作用要强于BCG⑨。在本试验中，我们对15例正常人及30例浅表性膀胱移行细胞癌患者治疗前后血液中VEGF水平进行检测发现膀胱移行细胞癌患者血液中VEGF水平较正常人明显增高，沙培林经膀胱灌注后患者血液中VEGF水平比治疗前明显降低，但仍高于正常人VEGF水平。Inoue K等⑥认为膀胱移行细胞癌患者在分泌VEGF肿瘤细胞和其他因素的共同作用下，血液中的VEGF水平显著升高，为肿瘤的新生血管的形成必要的物质基础，这一点在我们的研究中得到充分证实。经手术和沙培林膀胱灌注治疗6周后，患者血液中VEGF水平明显降低，说明通过此种综合疗法治疗，可能对产生VEGF的肿瘤细胞起到有效杀灭和清除的作用，从而抑制肿瘤新生血管的形成产生抑癌作用，为治疗浅表性膀胱移行细胞癌提供了另外一条有效途径。膀胱灌注6周后血液中的VEGF虽有明显下降，但与对照组比较仍有显著性差异，提示经过手术和膀胱灌注免疫治疗并不能完全降低肿瘤患者血液中VEGF至正常人水平，仍有分泌VEGF肿瘤细胞和其他促VEGF水平升高的因素存在，因此继续治疗和定期复查有助于降低膀胱肿瘤复发,检测血液中的VEGF水平在预防膀胱肿瘤复发过程中是必要的。

    目前国内关于用沙培林进行膀胱灌注的报道较少。我们对沙培林进行膀胱灌注的治疗仅是一个初步的探讨，其远期疗效、复发率、有效率、膀胱损伤及并发症发生率的相关临床资料并不完整，需要进一步观察研究。

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