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血管内皮生长因子及微血管密度在肝癌中的表达

2010-06-24 17:38:45 作者：新特药房来源：互联网浏览次数：49 文字大小：【大】【中】【小】

简介： 摘要目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在肝癌微血管形成中的作用以及与原发性肝癌生物学行为的关系。方法：选择32例原发性肝癌手术标本，采用免疫组织化学方法测定血管内皮生长因子及Ⅷ因子的蛋白表 ...

摘要目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在肝癌微血管形成中的作用以及与原发性肝癌生物学行为的关系。方法：选择32例原发性肝癌手术标本，采用免疫组织化学方法测定血管内皮生长因子及Ⅷ因子的蛋白表达。结果：血管内皮生长因子在原发性肝癌中的阳性表达率为65.63％；原发性肝癌中肿瘤微血管密度（MVD）为30.96±12.32，其中血管内皮生长因子表达阴性者MVD为19.12±7.34，血管内皮生长因子表达阳性者MVD为42.36±15.54，二者相比有显著差异（P＜0.01).结论:血管内皮生长因子能促进肿瘤中微血管形成,血管形成在原发性肝癌的生长和转移中起到重要的作用.

　　The Expression of Vascular Endothelial Growth Factor

　　and Microvessel Density in Primary Liver Cancer

Xu Hongyu Bi Li Yang Yiulin et al

　　The First Affiliated Hospital of Harbin Medical University, Harbin

　　AbstractObjective: To evaluate the function of expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and microvessel density (MVD) and to study the relationship between VEGF and the clinic characteristics of cancer.Methods: The expression of VEGF and Ⅷ factor in 32 patients with primary liver cancer were studied retrospectively by using immunohistochemical staining.Results: The expression of VEGF was 65.63％ in primary liver cancer patients which was significantly higher than that in normal individuals （P＜0.01).The microvessel density was 30.96±12.32 in primary liver cancer patients.The MVD in VEGF positive group was 42.36±15.54 and was higher than that of VEGF negative group （P＜0.01).Conclusion:VDGF plays an important role in the growth and metastasis of prinary liver cancers.

　　Key Words Primary liver cancer Vascular endothelial growth factor Microvessel density

　　大量的研究证明，实体瘤的生长和转移有赖于新生血管形成[1]。在无新生血管形成阶段，肿瘤亦无转移现象发生。血管内皮生长因子是一个重要的血管新生诱导剂。有文献报道，胃癌、脑肿瘤的新生血管化程度与肿瘤侵袭性及其预后有相关性，是一个独立的预后因素[2～4]。在这些研究中，常用因子Ⅷ相关抗原染色来显示微血管。原发性肝癌具有短时间内即可发生肝内门脉广泛转移的特点，自然病程仅为3～6个月，是严重威胁人民生命的一种恶性肿瘤。我们采用免疫组织化学方法检测血管内皮生长因子及Ⅷ因子在原发性肝癌中的表达，以探讨血管内皮生长因子及微血管密度与原发性肝癌的肿瘤生物学行为的相关性。

　　1 材料与方法

　　1.1 原发性肝癌标本

　　32例标本均为本院1994～1998年间外科手术切除标本，经病理检查证实为肝细胞癌。其中男27例，女5例；年龄在35～62岁之间，平均年龄43.76岁，术前未经过任何化疗和放疗，每例标本均带有癌旁组织。标本经福尔马林固定，常规脱水包埋，5μm连续切片，分别用于常规HE染色和不同的免疫组织化学及原位杂交染色。

　　1.2 染色方法

　　免疫组织化学染色：采用ABC法。ABC试剂盒、血管内皮生长因子抗体、Ⅷ因子抗体及各阳性对照片均购自武汉博士德生物工程有限公司。染色步骤按产品说明书进行。阴性对照设 PBS替代一抗的空白对照和正常兔血清（1:50）替代一抗的替代对照。

　　1.3 观察指标

　　1.3.1 光学显微镜下观察VEGF的表达位于细胞浆或细胞膜上,以每一组织切片中大于10％肿瘤细胞浆或细胞膜染色定为VEGF表达阳性。

　　1.3.2 微血管染色及定量方法采用Weidner报道的方法进行。先在40倍光镜下扫视整个切片，寻找高血管密度区，即“热点”，再在200倍视野下计数染成棕色的血管数目，结果用单个200倍视野下最多的血管数目来表示[6]。

　　1.4 统计学分析

　　相关数据分别用t检验、χ2检验或等级资料秩和检验进行统计学分析。

　　2 结果

　　2. 1血管内皮生长因子、微血管密度在原发性肝癌及癌旁组织中的表达

　　VEGF主要表达在细胞浆或细胞膜，32例肝癌标本中

分类例数 VEGF MVD

癌旁组织 32 32(100) 35.14±10.49

肝癌组织 32 21(65.63) 30.69±12.32

　　2.2 血管内皮生长因子及微血管密度与肿瘤临床病理资料　　见表2。

表2　32例原发性肝癌病例的临床病理资料　例（％）

分类 VEGF P值

阴性阳性

例数 11 21 　

肿瘤直径　　　

≤5cm 6(54.55) 2(9.52) ＜0.05

＞5cm 5(45.45) 19(90.48) 　

肿瘤包膜　　　

有 7(63.64) 10(47.62) ＞0.05

无 4(36.36) 11(52.38) 　

肿瘤分化　　　

高分化 7(63.64) 9(42.86) ＞0.05

低分化 4(36.36) 12(57.14) 　

门脉癌栓　　　

有 2(18.18) 15(71.43) ＜0.01

无 9(81.82) 6(28.57) 　

MVD 19.12±7.34 42.36±15.54 ＜0.01

，21例表达为阳性，表达率为65.63％，其中同一切片中的癌旁正常肝细胞的表达率为100％(表1)。

表1　VEGF、MVD在肝癌组织及癌旁组织中的表达　例（％）
　3 讨论　　原发性肝癌为临床常见的恶性肿瘤，年发病率达到31/10万，早期诊断率低，而且肝癌患者术前难以确定有无微小转移。因此，术后复发和转移成为目前临床急需解决的问题。大量研究证明肿瘤生长必需依赖血管生成，且无血管生成时，肿瘤亦无转移现象发生。血管内皮生长因子是强大的促血管生长因子，字能增加血管通透能力，促进内皮细胞增殖，对肿瘤的浸润和转移有重要影响。己有学者证明，血管内皮生长因子是反映胃癌、乳腺癌及脑肿瘤患者预后的因子[1-3]。

　　本研究结果正常肝组织中血管内皮生长因子表达为阴性，肝癌组织中的表达为65.63%,癌旁组织中的表达为100%,此结果与学者陶厚权报道胃癌中血管内皮生长因子的表达结果相似[2].而癌旁组织的高表达与肝癌短时间内即可发生肝内广泛转移的现象相符合.

　　目前多数学者认采用对血管内皮细胞抗原的免疫组织化学技术进行肿瘤血管定量的方法即MVD法,此方法准确可靠,MVD被认为是能反映肿瘤血管生成的一个指标,且有可能成为预测肿瘤转移、复发和预后的一项指标[5，6]。

　　本研究采用此方法测得肝癌组织的MVD为30.96±其中血管内皮生长因子表达阳性者MVD为42.36±15.54,血管内皮生长因子表达阴性者MVD为19.12±7.34.而且我们还观察到在微血管化密度较高的区域,新生血管化程度活跃,血管内皮生长因子的表达也高,反映血管内皮生长因子的表达与新生血管化部位具有一致性,怀陶厚权等在胃癌中研究结果相似[2].

　　本研究结果还显示血管内皮生长因子的表达与肿瘤的分期呈正相关。由此推测，血管内皮生长。因子是肝细胞癌中一种重要的促进肿瘤血管生长的因子，客观存在能促进肿瘤血管的形成，丰富血管网的建立，为肿瘤生长提供了充足的养分。因此肝细胞癌的生长和转移均委迅速，自然病程权为3～6个月.

　　因此，我们认为血管内皮生长因子对于原发性肝癌的生长和转移起到重要的作用。临床上应进一步制备相应的抑制剂，抑制血管内皮生长因子的表达，阻断血管内皮生长因子对血管的影响，从而达到抑制肝癌的生长和转移的目的，以延长肝癌患者的生存期。

　　本文课题受黑龙江省自然科学基金资助

　　参考文献

　　［1］张海滨，田野苹，叶天星.血管内皮生长因子与实体肿瘤.国外医学生理病理科学与临床分册，1998;18（2）：117

　　［2］陶厚权，林言浅，王瑞年，等.血管内皮生长因子表达在胃癌浸润转移中的作用.中华消化杂志，1998;18（5）：287

　　［3］陶厚权，王瑞年.血管内皮生长因子与脑肿瘤.国外医学神经病学神经外科学分册,1996;23（2）：146

　　［4］Kiyoshi Maeda,Yong－ suk Chung,Yoshinari Ogawa, et al. Prognostic Value of Vascular Endothelial Growth Factor Expression in Gastric Carcinoma. Cancer,1996;77(5):858

　　［5］夏景林，杨秉辉，叶胜龙.原发性肝癌肿瘤血管密度及其表达的临床病理意义.中华肿瘤杂志,1998;20（6）：440

　　［6］Weidner N. Curred pathologic methods for measuring intratumoral microvessel density within breast carcinoma and other solid tumors. Breast Cancer Res Treat,1995;36:169～ 80